“外泌体”的常见问题集锦~

如何鉴定提取出来的外泌体？以目前外泌体的分离手段很难获得十分纯净而且单一的外泌体样品，也没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。外泌体如何保存？不同时间、温度的保存对不同的外泌体样本影响不一；如果研究方向为外泌体形态特征...

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外泌体抗衰凭什么抢占“风头”？

外泌体抗衰凭什么抢占“风头”？据研究，在尿液、血清、唾液和母乳等体液中都检测到了外泌体，可见其分布之广。从作用原理上，外泌体通过胞吞、胞吐及膜融合的方式进入细胞，将其活性物质（如蛋白质、DNA、RNA等）释放至宿主胞质溶胶调控细胞生理功能；也可结合胞膜受体激活相关信号通路调控细胞功能，实现非细胞化再生医美治疗。另一方面，干细胞进行抗衰是严肃的科学命题，并非简单的细胞回注就可达到效果，干细胞使用十分严格，医疗机构开展的干细胞临床研究需由两委局协同共管，批准才能进行的，临床许可严...

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胎牛血清应用广泛，符合质控标准是关键

胎牛血清应用广泛，符合质控标准是关键以国内灭活病毒疫苗的制造过程为例，主要是通过体外大规模培养特定的细胞株来繁殖病毒。目前，主流培养液仍然采用基础培养基加血清的方式，强调了对有效培养方法和一致材料的迫切需求。正规来源的胎牛血清不会额外添加其他不明成分，除了含有细胞所需的营养成分及辅助因子之外，还含有转移和结合蛋白，有缓冲pH和解毒的作用，因而常用于疫苗生产细胞的培养。对于牛血清的应用场景，目前国内遵循的质量标准是2020版《中华人民共和国药典》三部通则（3604新生牛血清检测...

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胎牛血清有必要热灭活吗

—胎牛血清有必要热灭活吗—01目的血清的灭活就是将血清置于56℃作用30min，然后将它们分装储存于-20℃。热灭活的目的是为了去除血清中的补体等对热敏感的物质，以排除对免疫分析的影响。胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。研究人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定，他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1-3%，而其它补体成分仅有成年动物的5-50%，至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验，我们也在多个不同批次的胎牛血清中获得了相...

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血清的供应量改变带来的价格波动

血清的供应量改变带来的价格波动由于中国海关总署对供应企业和允许进口的血源地做出了明确规定，胎牛血清的价格便与这些血源产地的供应量息息相关。胎牛血清是一种天然产物，产地牛源的健康状况和生长环境尤为重要，当牛源产地气候变化时，会极大的影响胎牛血清的产量。例如2018年澳洲地区发生干旱，导致农场主不得不屠宰超量的牛以避免损失，这种情况间接导致当年澳洲血源的胎牛血清供应链同比往年有一个显著的增长。所以说，跟一般的商品不同，胎牛血清的供应量并非仅由胎牛血清的市场需求决定，而是由当年的气...

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一般在拿到细胞后，应该注意什么?

一般在拿到细胞后，应该注意什么?收到细胞后先不要开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议对收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封，出现污染状况一般可以再申请免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培...

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血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？

血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？血清在解冻过程（包括没有*解冻）或储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如凝集素、纤维蛋白原和玻连蛋白等）可能会聚集成团，形成絮状沉淀或外观混浊；在运输过程中，由于时间较长，所以往往有少许解冻，因此也可能稍有沉淀，但这些都不影响血清性能。若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞过滤膜。

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耐药细胞构建方法

耐药细胞构建方法目前已知的体外建立耐药细胞株的方法主要有以下几种：大剂量药物冲击法、药物浓度递增法、药物浓度递增与大剂量药物冲击相结合法、转基因结合药物筛选法。其中药物浓度递增法和大剂量药物冲击法成为临床建立肿瘤细胞化疗耐药模型的常用方法。①药物浓度递增法是指最初使用低浓度的药物刺激细胞，等待细胞适应低浓度的环境之后，再略微提高药物浓度，继续等待细胞适应目前的环境，经过反复的培养和加压，最终使细胞可以在高浓度的药物环境下生存。②大剂量药物冲击法是在细胞培养时加入超高药物浓度的...

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