网站首页技术中心 > NTC胎牛血清出现颜色或沉淀的问题
NTC胎牛血清出现颜色或沉淀的问题
更新时间:2023-03-27 点击量:1098

NTC胎牛血清出现颜色或沉淀的问题

NTC胎牛血清

货号:SFBE

阿根廷

1、问:我用的是四季青的胎牛血清,56℃30分钟灭活后出现了白色少量絮状沉淀,是不是污染?还能不能 再用?血清的生产日期是2006年7月(现在是2007年6月11日)。

答:应该问题不大。你可以取少量血清放入培养皿中,37℃过夜培养看看就知道是否污染了。血清中沉淀 物的出现有许多种原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在 血渭解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。 若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。

2、问:我用MTT法测细胞的增殖,用DMSO裂解细胞,发现把DMSO加入到孔中就会形成乳白色(用的含胎牛血 清的1640培养基,由于没有离板子的离心机,所以没有去除培养基直接加的DMSO)。以前用含小牛血清的培养基没有 看到有这种情况。该怎么解决?

答:为什么要用离心机离心呢?难倒你养的是悬浮细胞吗?如果是贴壁细胞的话直接将MTT倒掉,再加DMSO 即可,我们就是这么做的,效果很好!并且测细胞的增殖的话如果不去掉MTT就加DMSO的话误差应该很大!有时不一定就是血清的原因,可能跟你的MTT放置的时间或以及其他成分有关!

原代培养:

当采用外科操作的方法将细胞从有机体中分离下来,然后置于合适的培养环境中,它们会附着、分裂和生长。这称为原代培养。

原代培养有两种基本的方法。

第一种,使用外植块,将小片的组织粘附到玻璃或经处理的塑料培养瓶中,并浸于培养液中。几天之后,单个细胞将从组织外植块中移动到培养瓶的表面或基质中开始分裂生长。

第二种方法,也是使用更广泛的方法,通过在组织碎片中加入消化(蛋白水解)酶,如胰酶或胶原酶,消化成团聚集的细胞从而加快这一步骤。最终得到单细胞的悬液,然后将其置于含有培养液的细胞培养瓶内,让其继续生长分裂。这种方法成为酶解。

3、问:(1)GIBCO胎牛血清500ml,今天解冻后没有混匀直接分装,结果使得前面的几管是清亮的,后面就 带有棕色的,不知有没有影响?估计有什么影响?前面的成分好还是棕色的成分好啊?

答:肯定有。最好还是重新混合重新分装,我觉得有效成分会集中在棕颜色部分。

问:(2)为什么会出现棕色呢?

答:血清中的棕色多一些可能是因为红蛋白的含量高些的缘故吧。

问:(3)血清灭活之后可以存放吗?我的是前天mie活的,但是没有加到培养基里,而是放在冰箱里,那下次 可以直接用吗?还是再次灭活啊?

答:当然可以,如果多的话,分装后最好放在-20℃,下次用时再解冻,也不用再灭活。最好用一管拿一 管,少许血清可以放在4℃。分装时还要注意不要装得太满,以免溢出污染。

关于心肌细胞元代培养的FBS问题:

 (1)1%的血清wan全培养基可不可以,得看你胰酶的用量。但是在心肌细胞元代培养就不行。 10%的FBSwan全培养基效果都不太好,开始心肌细胞元代培养需要高浓度的FBS,20%左右,但这就有出现另一个问题,在FBSwan全培 养基中,成纤维细胞呈优势细胞,须得在培养基加入适量的BrdU以抑制其生长,纯化心肌细胞。

 (2)FBS的作用不仅仅是拿来中和胰酶,只是FBS中的一些蛋白质如α-巨球蛋白等有抑制胰酶活性作用 。

 (3)元代心肌细胞培养的FBS使用,有讲究:刚开始使用20%左右的高浓度的FBS,后逐渐递减为无血清的 DMEM/F-12培养基培养。