细胞收到后注意事项

1、收到细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系

2、收到细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题，细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来，显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况，出现此状态时，请不要打开细胞培养瓶，先不要把培养基吸出来。应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右，让细胞先稳定下，再于显微镜下观察，此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁，请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理

3. 收到细胞时如无异常情况 ，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，用75%酒精（建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水。喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作：然后打开盖子，先用枪头把培养基吸出10ML左右，放在离心管里，然后瓶口过火，（严禁直接倾倒），这样可以保证不污染，再用10ML的移液管，将剩余的培养基全部吸出，放于离心管中，培养瓶中只剩余5-10ML左右培养液继续培养就可以了）：超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。

如为悬浮细胞，吸出培养液，1000转/分钟离心3-5分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

4，将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里，存放于4℃冰箱，以备不时之需。第二天换液时，要配制新鲜的培养基和进口胎牛血清。这样对细胞生长更好。不要再用我们原瓶的培养基了。

5 、24小时后，细胞形态已恢复并贴满瓶壁，就可以传代了。（贴壁细胞）将培养瓶里的培养基倒去，加3-5ml（以能覆盖细胞生长面为准）PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化时间以具体细胞为准，一般1-3分钟，不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁，见细胞脱落下来，加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞，使之wan全脱落，然后将溶液吸入离心管内离心，1000rpm/5min。弃上清，视细胞数量决定分瓶数，一般一传二，如细胞量多可一传三，有些细胞不易传得过稀，有些生长较快的细胞则可以多传几瓶，以具体细胞和经验为准。（悬浮细胞）用移液管轻轻吹打瓶壁，直接将溶液吸入离心管离心即可。

6，贴壁细胞 ，悬浮细胞。严格无菌操作。换液时，换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液和进口胎牛血清，37度    5%CO2 培养

7.  收到细胞后，请镜下观察细胞，用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多，请离心收集细胞，接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液，使用新鲜配制的培养基，使用进口胎牛血清. 刚接到细胞，若细胞不多时 血清浓度可以加到15％去培养。若细胞迏到80%左右 ，血清浓度还是在10％。

 胰蛋白酶消化；

加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

吹打分散细胞：

吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液， 用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。