细胞名称：人乳腺癌阿霉素耐药细胞（STR鉴定）

细胞代码： MCF-7/Adr 

培养条件： 1640+10%FBS+0.01mg/mL胰岛素+1%PS+500ng/mL ADR

生长状态：贴壁生长

耐药细胞构建方法

目前已知的体外建立耐药细胞株的方法主要有以下几种：大剂量药物冲击法、药物浓度递增法、药物浓度递增与大剂量药物冲击相结合法、转基因结合药物筛选法。其中药物浓度递增法和大剂量药物冲击法成为临床建立肿瘤细胞耐药模型的常用方法。

①药物浓度递增法是指最初使用低浓度的药物刺激细胞，等待细胞适应低浓度的环境之后，再略微提高药物浓度，继续等待细胞适应目前的环境，经过反复的培养和加压，最终使细胞可以在高浓度的药物环境下生存。

②大剂量药物冲击法是在细胞培养时加入超高药物浓度的药物，但是孵育的时间很短，一般仅有几分钟，然后将细胞转移至不含药物的培养液中慢慢恢复，通过重复以上步骤最终筛选出高倍数的耐药细胞株。

这两种方法各有优缺点：药物浓度递增法的优点在于诱导耐药细胞的药物剂量循序渐进，细胞培养的外环境逐渐改变，细胞较易耐受, 状态较好, 缺点在于诱导耐药过程耗时很长，且其化药物的作用方式与临床上疗药物大剂量短疗程的疗原则存在一定的差异；大剂量药物冲击法的诱导的优点是与临床上大剂量药物冲击的治疗方式相接近，但是缺点在于大剂量药物冲击法的药物浓度很高，细胞培养由于外环境骤变，细胞可能难以耐受，细胞状态较难控制，且耐药性能不稳定。

建立模型的评价方法

建立模型的评价方法主要有以下两种：耐药倍数的检测；耐药相关蛋白的检测。①通过MTT、CellTiter-Glo发光法（CTG）测定药物对亲本细胞和耐药细胞的IC50，计算耐药指数。耐药指数（Resistance index，RI）=耐药细胞系IC50/亲本细胞系IC50。②WB、PCR、流式、免疫学等多项方法检测耐药相关蛋白（P-糖蛋白、多药耐药蛋白1）的表达情况。

人乳腺癌阿霉素耐药细胞（STR鉴定）

人肝窦内皮细胞永生化

人肠癌细胞永生化

人颈静脉球瘤细胞永生化

人副神经节瘤细胞永生化

人肠息肉上皮细胞永生化

人原代听神经瘤细胞永生化

人原代髓核细胞永生化

人原代神经鞘膜瘤细胞永生化

人胰腺肿瘤成纤维细胞永生化

人眼睑皮脂腺癌细胞永生化

人主动脉瓣膜间质细胞永生化

人睾丸支持细胞永生化

人骨骼肌细胞永生化

人卵巢癌细胞永生化

人真皮成纤维细胞永生化

人原代甲状旁腺主细胞永生化

人原代乳腺上皮细胞永生化

人原代乳腺癌成纤维细胞永生化

人原代软骨细胞永生化

人脐静脉内皮原代细胞+GFP 原代细胞+GFP

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染突变型

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染野生型

小鼠肺成纤维细胞永生化

小鼠附睾脂肪干细胞永生化

小鼠肾小球系膜细胞永生化

小鼠胰腺星状细胞永生化

小鼠脂肪干细胞永生化

麝香鼠原代乳腺上皮细胞永生化

小鼠骨髓巨噬细胞永生化

小鼠角膜上皮细胞永生化

小鼠肝星状细胞永生化

大鼠脑微血管内皮细胞永生化

大鼠内皮祖细胞永生化

大鼠脂肪干细胞+RFP 原代细胞+RFP

鸡胚成纤维细胞永生化

鸡气管黏膜上皮细胞永生化

鸭脑微血管内皮细胞永生化

鸭胚成纤维细胞永生化 Duck embryo

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羊睾丸间质细胞永生化

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37.如何从T25瓶中转移sf9细胞？能用蛋白酶消化吗？

我们推荐使用脱落细胞的方法，此技术破坏性最小，生活力最高。通过使用巴斯德吸液管，让细胞上培养基流动。作为一种选择你也可以轻轻拍打培养瓶。只有在绝对必要的情况下，才使用胰消化细胞。

38.胰消化一个T25瓶的sf9细胞：

1. 去除培养基。

2. 用2ml 1xPBS（足以覆盖细胞表面）洗涤细胞，去除PBS。

3. 加入2ml 1x胰EDTA（恰好覆盖细胞表面）。

4. 37 ℃孵育5到10分钟。在仪器下检测看到5分钟后它们正在向上移动。

5. 向细胞中加入2ml 细胞培养液，移入锥形管，用2ml培养液洗瓶壁，移入同一锥形管中。（培养基中的FBS终止了胰的活性。）

6. 离心（1100rpm）沉淀细胞。去除培养基。

7. 用新的培养基重新悬浮细胞。传代。

39.在Sf9, Sf21, 和high Five细胞悬浮培养时，肝素的使用量是多少？

为了防止悬浮培养细胞聚集的形成，使用肝素浓度为10单位/毫升细胞悬液。

40.在重新冻存sf9细胞前，它可以传多少代？随着传代的次数的增加，它的感染能力会降低吗？

通常情况当细胞经过30次传代后，应该返回冻存。无论什么时候计数时，都应该检查细胞活力。如果超过95％的细胞保持有活力和在大约30小时左右加倍，细胞仍然可以使用。如果活力和加倍时间下降，它们的感染力将不在是有效的。

41.贮存在冰箱中的瓶口已开的培养基，在放置几天后颜色变紫?

这主要是由于在暴露到周围的CO2水平时，碳酸氢纳导致了pH值的上升。您可以在使用前松开瓶口，在CO2培养箱孵育培养基10-15分钟，来校正溶液的pH值（确定松开瓶口以保证气体交换）。

42. 细胞培养基偶然被冻，可否继续使用？

如果细胞培养基偶然被冻，您应该熔化培养基并观察是否有沉淀产生。如果没有沉淀产生，培养基可以正常使用，如果出现沉淀，只能丢弃这些培养基。

43. 无血清培养与有血清培养使用的抗生素量一样吗？

当在无血清培养基中添加抗生素时，降低至少在有血清培养基中所使用浓度的50%。血清蛋白会结合和灭活一些抗生素。在无血清培养条件下，抗生素不被灭活，可能对于细胞达到毒性水平。

44. 培养基中添加了血清和抗生素后，可长期保存吗？

一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时，您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

45.培养基及其它添加物和试剂可反复冻融吗？

大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多都会在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，将会影响它的性能。

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