人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926

苏州千舍生物，细胞培养试剂，常备国内外品牌血清/胎牛血清，拥有完善的细胞库管理体系，供应上万种类细胞株细胞系，公司细胞技术60%为硕士和博士学历，其中明星产品有：DC2.4细胞、RAW264.7细胞、COV434细胞、HO-8910细胞、A2780细胞、SK-OV-3细胞、OVCAR-3细胞、OVCA433细胞、HEK-293-6e细胞、FRO细胞、HEPG2.2.15细胞、HL-7702细胞、L-02细胞、M-ICC12细胞、143B细胞、HOS细胞、M4e细胞、M2e细胞、TU686细胞、TU212细胞、vero细胞、SW48细胞、SW480细胞、NCCIT细胞、B16-F10细胞、HK-1细胞、Hep2细胞、C666-1细胞、HNE1细胞、HNE1/DDP细胞、capan-1细胞、vero e6细胞、A375细胞、Hs294T细胞、HSC-LX-2细胞、LOVO细胞、MKN-28细胞、RL952细胞、Hela细胞、A549细胞、Ishikawa细胞、EBC-1细胞、H1993细胞、H1993细胞、Hep-2细胞、NCI-H441细胞、LS174T细胞、NCCIT细胞、capan-1细胞、Hep3B细胞、HUVEC细胞、SW116细胞等。

  我公司以客户为核心，以产品质量求生存，以售后服务求信誉。我们通过不断改进来提高效率，绝不以牺牲品质作为代价。“诚信、创新、严谨、专业”愿以饱满的热情期待各界朋友携手合作，共创辉煌！

人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926几种常用细胞培养基产品

⒈ BME(basal medium eagle)基础培养基

⒉ MEM

⒊ DMEM

⒋ IMDM

⒌ RPMI-1640

⒍ M199

⒎ Mccoy's 5A

⒏ F10 F12 DMEM混合F12(三)几种常用细胞培养配套试剂的配置(缓冲液、平衡盐溶液等)

五、细胞传代培养（消化法）

具体操作：

（一）传代前准备

1.预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴锅内预热。

2.用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。

3.正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。

4.点燃酒精灯：注意火焰不能太小。

5.准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8分钟再次消毒。？？？

6.取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。

7.从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭

显微镜

的台面，再在镜下观察细胞。

8.打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

（二）胰蛋白酶消化

1.加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。

3.吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。

（三）吹打分散细胞

1.吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。

2.吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。

3.平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8分钟。

4.弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。

（四）分装稀释细胞

1.分装：将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。

2.显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/ml。最后要做好标记。

（五）继续培养

用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养。传代细胞2小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时为一个＋，占50％为＋＋，占75％时为＋＋＋。

传代细胞培养注意事项：

1.严格的无菌操作

2.适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，连接变松散，或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。

附：EDTA（0.02％乙二胺四乙酸二钠）消化液配方：EDTA 0.20g，NaCl 8.00g， KCl 0.20g， KH2PO4 0.02g， 葡萄糖 2.00g，0.5％酚红4ml，加入蒸馏水定容至1000ml。10磅20min高压灭菌，使用时调节PH值到7.4。注意EDTA不能被血清中和，使用后培养瓶要*清洗，否则再培养时细胞容易脱壁。

六、细胞的复苏

细胞复苏的原则--快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

人乳腺癌细胞+LUC细胞，MCF-7+Luc人结直肠腺癌细胞 COLO320

人结直肠腺癌细胞 COLO320 DM

人结直肠腺癌细胞 COLO320 HSR

人结肠癌细胞 CW-2

结肠癌细胞 cx-1

人肝癌细胞 hepg2.2.15

人肝癌细胞 Hep3B2.1-7 [Hep3B]

人肝癌细胞 HEPG2

人肝癌细胞人肝癌(HBV) HEPG2.2.15

人 SV40  转染成骨细胞 HFOB1.19

人胃癌细胞 HGC-27

人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2

人肾上皮细胞 HKb-20

人早幼粒白血病细胞 HL 60（hl-60）

人肝细胞 HL-7702[L-02]

人高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM

人骨肉瘤细胞 HOS

人胰腺癌细胞 HPAC

人胎盘细胞（有限细胞系） Hs 815.Pl

人乳腺癌细胞 HS578T

人脑胶质瘤细胞 HS683

人真皮成纤维细胞（原代细胞永生化） HSF(SV40)

人纤维肉瘤细胞 HT-1080

人膀胱癌细胞 HT-1376

人结肠癌细胞 HT-29 (HT29)

人眼小梁网细胞 HTMC

人胰腺导管细胞 HPNE

人肝癌细胞 huh-7

人肝癌细胞 huh-7.5.1

人T淋巴细胞白血病细胞 HUT-78

人十二脂肠腺癌 HUTU-80

人脐静脉内皮细胞（原代细胞永生化） HUVEC

人脐静脉内皮细胞 HUV-EC-C

人脐静脉内皮细胞 HUVEC-RFP

人脐静脉内皮细胞 HUVEC-GFP

人诱导多能干细胞 iPS

人子宫内膜癌细胞 Ishikawa

人正常卵巢上皮细胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN）

人胚肺成纤维细胞 IMR-90

人急性T细胞白血病细胞 J.gamma1

人膀胱移行细胞癌 J82

人胎盘绒毛癌细胞 JAR

人胰腺癌细胞 JF-305

人绒毛膜癌细胞 JEG-3

人T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat（clone E6-1）

人慢性骨髓性白血病细胞系 K562

人K562耐阿霉素细胞株 K562/ADR

人口腔表皮癌细胞 KB

人脑胶质细胞瘤细胞 KNS-89

人外周血嗜碱性白血病细胞 KU812

人食道癌细胞 kyse30

人胶质瘤细胞 LN229

人前列腺癌细胞 LNCaP clone FGC

人结直肠癌细胞 lovo

人结直肠腺癌细胞 LS174T

人结直肠癌细胞 LS513

人肝星形细胞 LX-2

人乳腺上皮细胞 MCF-10A

人乳腺癌细胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐药细胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌细胞荧光素酶标记 MCF-7+luc

人乳腺细胞 MDA-KB2

人乳腺癌细胞 MDA-MB-231

人乳腺癌细胞 MDA-MB-231-LUC

人乳腺癌细胞 MDA-MB-361

人黑素瘤细胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌细胞 MDA-MB-436

人乳腺癌细胞 MDA-MB-453

人乳腺癌细胞 MDA-MB-468

人膜间皮细胞 MET-5A

人骨肉瘤细胞 MG63

人胃癌细胞 MGC-803

人高转移性肝癌细胞 MHCC-97H

人高转移性肝癌细胞 MHCC-97L

人胰腺癌细胞 MIA-PACA-2

人急性淋巴母细胞白血病细胞 MOLT-4

人胚肺成纤维细胞 MRC-5（有限细胞系）

人急性淋巴母细胞白血病细胞 MT-4

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