人原代星形胶质细胞 

 

 产品编号：

产品规格：>5×10⁵细胞数

产品价格：9650

包装规格：1ml冻存细胞悬液或T-25培养瓶

细胞详述：

神经胶质细胞广泛分布于中枢神经系统内，是除了神经元以外的所有细胞，在中枢神经系统中数量大约是神经元的十倍。具有支持、滋养神经元的作用。

胶质细胞与神经元一样也具有细胞凸起，但其胞质凸起不分树突和轴突。

星形胶质细胞，是胶质细胞中体积大的一种。从胞体发出许多长而分支的突起，伸展充填在神经细胞的胞体及其突起之间，起支持和分隔神经细胞的作用。

细胞特性:

1)  组织来源于人的正常脑组织。

2)  细胞鉴定：神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法。

3)  经鉴定细胞纯度高于90%。

4)  不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)  细胞生长方式：梭形细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

我们推荐使用原代星形胶质细胞培养体系作为体外培养原代星形胶质细胞的培养基。

人原代星形胶质细胞常见问题：

1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

要冷藏！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的PH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~一年。

2. 体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20◦C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4◦C冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。

3. 培养用液pH对细胞生长的影响

由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不*相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。

但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。因此，我们在配制培养用液时，可把液体的pH稍微调得偏酸一些。液体在经过0.10um或0.22um滤膜过滤时，溶液的PH还会向上浮动0.2左右。

4. 常用培养基及培养用液的渗透压范围

培养基名称渗透压范围（mOSM）

DMEM（高糖）315~350

DMEM（低糖）270~330

RPMI-1640260~290

MEM-EBSS280~310

MEM-NEAA280~310

McCoy5a280~310

MEM-a280~310

M—199275~305

IMDM270~300

DMEM/F-12280~310

F—10270~300

F—12275~300

培养基名称渗透压范围（mOSM）

L—15280~320

D-Hanks280~300

Hanks280~300

PBS275~300

5. 细胞传代消化时所用胰酶浓度越高越好吗？

不见得！因为胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、温度、胰酶浓度及溶液中是否含有Ca++,Mg++离子和血清等因素有关。通常情况下，pH8.0,温度37oC其作用能力z强。另外，钙、镁离子及血清均能大大降低其消化能力。我们每次进行传代消化前，一定要用D-Hanks液或PBS液反复冲洗细胞培养瓶，以便于将含血清的培养基冲洗干净，这样就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液浓度为：

（1）０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ；

（2）０.２５％胰蛋白酶＋０.０３％ＥＤＴＡ。

（3）0.25%胰蛋白酶

溶液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配制。多数细胞传代消化可使用０.０５％胰蛋白酶＋０.０２％ＥＤＴＡ这种消化液。

6. 培养基在使用过程中应注意的问题：

（1）培养基在使用前需37oC预热或在室温平衡后再使用。

（2）细胞培养过程中，吸取过培养液的吸管不能再用火焰烧灼，防止残留在吸管内的培养基焦化，将有害物质带入培养液中。

（3）尽量缩短各种液体、细胞的暴露时间。

（4）避免液体间、细胞间的交叉污染。

（5）配制*培养基时，配制的量在2周内用完为好。

7. 血清的有关问题：

新生牛血清：新出生牛5天内取血制成

小牛血清：小牛出生16周以内采血制成。

胎牛血清：（进口血清）要求剖腹取胎制成。

国内厂家往往不能做到，经常把出生2天以内采血称为胎牛血清。

根据血清的生产工艺及血红蛋白、内毒素含量又分为：

（1）.特级胎牛血清：40纳米过滤，内毒素含量≤10EU，血红蛋白含量≤10mg/dl。

（2）.优等胎牛血清：经过3次100纳米过滤，内毒素含量≤25EU/ml，血红蛋白含量≤25mg/ml。

（3）.标准胎牛血清：3次100纳米过滤，低内毒素，低血红蛋白含量。

（4）.活性碳/葡聚糖处理血清：激素含量大大降低。

（5）.透析型胎牛血清：次黄嘌呤和胸腺核苷含量大大降低。

8. 其他细胞培养用液：除培养基、血清、谷氨酰胺外，其他几种液体也属必须，不可省略。

（1）双抗：200倍，（1ml/支）其终浓度为青霉素100U/ml；链霉素100ug/ml，-24oC保存。

（2）L-谷氨酰胺：100倍，（1ml/支），终浓度2mM，-24oC保存。

（3）丙酮酸钠：配制浓度50mM，4ml/支，终浓度为1mM/ml，-24oC保存。

（4）Hepes液：配制浓度1M（5ml/支），一支Hepes加入到200ml

*培养基中，终浓度为25mM/ml，常温保存。

9. 支原体污染及检测：

（1）支原体污染在细胞培养中z常见、不易被查觉，但支原体污染可显著影响细胞功能干扰实验结果。支原体是介于细菌和病毒之间的目前所知能独立生活的z小微生物，它无细胞壁，形态呈高度多形性，z小直径0.2um，可通过滤器。

目前通过对国内100余株/系细胞的检测，形势不容乐观。污染率达30%~60%。课题组从国外引进细胞株/系也经常出现支原体的污染。支原体在污染细胞后，它通过影响细胞的DNA、RNA的合成及急速消耗培养基中的氨基酸来抑制细胞的生长，并能降低细胞的融合率。因此，在运用各种细胞系进行实验研究时，首先要证明所用细胞有无支原体的污染。

（2）支原体污染后，培养基可不发生浑浊，细胞病变轻微或不明显，因此难以发现。目前，支原体检测的方法有以下几种。

（a）相差显微镜观察；

（b）低张处理地衣红染色法；

（c）荧光染色法；

（d）酶标法；

（e）PCR法：使用该方法进行检测。

优点：灵敏度高，检测耗时短，样品量小

（只需50ul细胞培养用液上清）。

缺点：引物及制剂费用较高。   

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