A549细胞培养说明

A549细胞培养说明

一、细胞基本信息

来源：人非小细胞肺癌（NSCLC）组织。

类型：贴壁生长，上皮样细胞。

应用：常用于癌症、药物筛选、毒理学及基因表达研究。

二. 培养基及试剂

基础培养基：DMEM（高糖）或 RPMI-1640。

添加成分：

   10% 胎牛血清（FBS）。

   1% 青霉素-链霉素双抗（可选）。

消化试剂 ：0.25% 胰酶-EDTA。

三、培养步骤

1、复苏细胞：

   - 快速解冻（37℃水浴），离心后重悬于培养基，接种于培养瓶。

2、培养条件：

   - 37℃、5% CO₂ 培养箱。

   - 每2-3天换液，观察细胞密度达80%-90%时传代。

3、传代操作：

   - 弃旧液，PBS清洗。

   - 加入胰酶消化1-2分钟，显微镜下确认细胞脱落。

   - 加入含血清培养基终止消化，离心后按1:3至1:5比例分瓶。

四、注意事项

污染防控：严格无菌操作，定期检测支原体。

细胞状态：贴壁不良或空泡增多时需排查培养基或污染。

冻存：使用冻存液（含10% DMSO），逐步降温后存于液氮。

常见问题：

一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成，

首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混油。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下现察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关:

(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸:

(2)配制培养基的pH值偏高，不直细胞生长;

(3)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除;

(4)血清等级不足以维持细胞良好的生长，更换高等级的胎牛血清。