A549细胞培养说明
一、细胞基本信息
来源:人非小细胞肺癌(NSCLC)组织。
类型:贴壁生长,上皮样细胞。
应用:常用于癌症、药物筛选、毒理学及基因表达研究。
二. 培养基及试剂
基础培养基:DMEM(高糖)或 RPMI-1640。
添加成分:
10% 胎牛血清(FBS)。
1% 青霉素-链霉素双抗(可选)。
消化试剂 :0.25% 胰酶-EDTA。
三、培养步骤
1、复苏细胞:
- 快速解冻(37℃水浴),离心后重悬于培养基,接种于培养瓶。
2、培养条件:
- 37℃、5% CO₂ 培养箱。
- 每2-3天换液,观察细胞密度达80%-90%时传代。
3、传代操作:
- 弃旧液,PBS清洗。
- 加入胰酶消化1-2分钟,显微镜下确认细胞脱落。
- 加入含血清培养基终止消化,离心后按1:3至1:5比例分瓶。
四、注意事项
污染防控:严格无菌操作,定期检测支原体。
细胞状态:贴壁不良或空泡增多时需排查培养基或污染。
冻存:使用冻存液(含10% DMSO),逐步降温后存于液氮。
常见问题:
一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,
首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混油。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下现察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:
(1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸:
(2)配制培养基的pH值偏高,不直细胞生长;
(3)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除;
(4)血清等级不足以维持细胞良好的生长,更换高等级的胎牛血清。
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