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耐药细胞构建方法
发布时间:2022-03-11 点击量:652

耐药细胞构建方法






 目前已知的体外建立耐药细胞株的方法主要有以下几种:大剂量药物冲击法、药物浓度递增法、药物浓度递增与大剂量药物冲击相结合法、转基因结合药物筛选法。其中药物浓度递增法和大剂量药物冲击法成为临床建立肿瘤细胞化疗耐药模型的常用方法。


①药物浓度递增法是指最初使用低浓度的药物刺激细胞,等待细胞适应低浓度的环境之后,再略微提高药物浓度,继续等待细胞适应目前的环境,经过反复的培养和加压,最终使细胞可以在高浓度的药物环境下生存。


②大剂量药物冲击法是在细胞培养时加入超高药物浓度的药物,但是孵育的时间很短,一般仅有几分钟,然后将细胞转移至不含药物的培养液中慢慢恢复,通过重复以上步骤最终筛选出高倍数的耐药细胞株。


这两种方法各有优缺点:药物浓度递增法的优点在于诱导耐药细胞的药物剂量循序渐进,细胞培养的外环境逐渐改变,细胞较易耐受, 状态较好, 缺点在于诱导耐药过程耗时很长,且其化疗药物的作用方式与临床上化疗药物大剂量短疗程的化疗原则存在一定的差异;大剂量药物冲击法的诱导的优点是与临床上大剂量化疗药物冲击的治疗方式相接近,但是缺点在于大剂量药物冲击法的药物浓度很高,细胞培养由于外环境骤变,细胞可能难以耐受,细胞状态较难控制,且耐药性能不稳定。





建立模型的评价方法

建立模型的评价方法主要有以下两种:耐药倍数的检测;耐药相关蛋白的检测。①通过MTT、CellTiter-Glo发光法(CTG)测定药物对亲本细胞和耐药细胞的IC50,计算耐药指数。耐药指数(Resistance index,RI)=耐药细胞系IC50/亲本细胞系IC50。②WB、PCR、流式、免疫学等多项方法检测耐药相关蛋白(P-糖蛋白、多药耐药蛋白1)的表达情况。



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