2020-315
样品前处理:a)对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。c)对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20...
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2020-313
苏州千舍生物提示细胞培养需注意哪些细节养细胞是一件戳心戳肺的事情,你要像照顾小孩一样仔细对待,爱护她,呵护她。如果你照顾的时候能注意这些问题,会让你的细胞养的更好。下面就将养细胞的注意事项跟大家交流一下。一、细胞培养前的准备在您带上手套开始细胞培养之前,先检查一下移液管和瓶子的数量是否充足,以免在开始实验后再次出入操作台,这样可以降低细胞污染的风险。细胞培养基也应先预热,选择只预热部分培养基而非整瓶加热,不但可以节约实验时间,而且可以避免因反复加热培养基而造成的蛋白质降解。结...
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2020-313
苏州千舍生物教你如何挽救细胞污染以自建细胞系(laryngealsquamouscarcinoma-1,LSC-1)第12代的某一被细菌污染的细胞株采取救治,比较效果并分析细胞生物学特性。一、实验方法1、抗生素法:细菌培养:用无抗生素*培养液培养细胞3d,收集上清离心后将沉淀物接种于血琼脂培养基,35e培养。所采用的抗生素包括临床常用的15种抗生素,抗生素zui适抑菌浓度筛选:根据细菌药敏实验结果选出敏感抗生素,每种抗生素从zui低抑菌浓度MIC到zui高耐药浓度分别配制6个...
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2020-313
苏州千舍生物教你如何解决“细胞空泡化”“细胞空泡化”在细胞培养中也是一个常见问题,它的出现原因有多种,实验人员碰到往往会很头疼。在文章中小给列举出了可能出现这种情况的原因,方便大家进行分析选择解决的方法。一、可以引起细胞空泡化出现的原因有哪些?1.细胞老化原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况,是有些细胞处于终末分化状态,不会再分裂,时间长了就会空泡化而死亡。传代细胞出现这种状况比较少见,出现的原因一般都是因为细胞传代次数过多,老化严重。2.PH值培养液的PH值与细胞正常所需...
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2020-313
苏州千舍生物教你如何选择培养基和血清细胞培养是实验室里常规和基础的实验了,但却不是简单的。别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起。经典的培养基有很多种,GIBCO、HyClone、Sigma等。其中DMEM、RPMI-1640、MEM、DMEM/F12都是应用zui广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。◆MEM是由Eagle’s基础培养基...
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2020-313
苏州千舍生物提示细胞培养需注意事项细胞培养在生命科研的地位举足轻重。实验君的很多成果可谓是成也细胞培养,败也细胞培养。然而细胞虐我千百遍,我待细胞如初恋!科研人是不会这么被轻易打败的。1.新买的细胞如何处理?细胞刚拿到手应赶紧做这几件事:检测瓶子是否破裂;培养基是否漏出,是否浑浊;是否有支原体污染;迅速扩增冻存。2.能否使用与原先培养条件不同的培养基?不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供培养条件不同的培养基,细胞大都无法立即适应,造成细胞无...
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2020-312
苏州千舍生物教你如何培养细胞之细胞消化细胞培养,尤其是细胞系的培养,就细胞消化而言,多做、善于总结,就可以把细胞养的越来越好。绝大部分细胞消化只要用胰酶润洗一遍即可:吸去胰酶后,残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞(绝大部分1min不到)。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞,连续这样传代,对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去,胰酶润洗吸去,然后37度消化。怎样算是消化好了呢?不需要把细胞全部消化成间隔分布很离散的单个圆形...
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2020-312
苏州千舍生物教你如何更好的培养细胞在细胞培养过程中会出现这样或那样的问题,这些问题从细胞生长角度来说,针对细胞不贴壁、生长缓慢、生长不好,甚至死亡的原因,我们做以下分析并提出相对应的解决方法。一、培养细胞不贴壁可能原因:●胰蛋白酶消化过度;●支原体污染;●培养基pH值过碱(NaHCO3分解);●细胞老化;●接种细胞起始浓度太低或太高。解决方法:●缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度;●分离培养物,检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物;●使用无菌醋酸溶液...
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