细胞培养中黑点的问题~~

24、培养中常出现一些黑点，是污染吗?首先肉眼观察培养液是否变浑浊，如果变浑浊，基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊：在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的)，也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。25、如何预防细胞培养中黑点的产生?掌握细胞传代的最佳时机，不要...

查看更多

胎牛血清常见问题集合~

①保存血清最好方法是什么？我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的无菌容器内，再放回冷冻。反复冻融会对血清的品质造成不良影响。②如何解冻血清才不会使产品质量受损？我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。③血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？血清在解冻过程（包括没有*解冻）或储存在2-8℃时，血清中的各...

查看更多

经费不是很充足，但是用量也蛮大，怎么选血清

经费不是很充足，但是用量也蛮大，怎么选血清这个是最多的一个群体，有些老师有钱，但是这个钱也是自己辛辛苦苦取得的，所以我觉得可以考虑一些小品牌，但是小品牌不代表是假货，不代表是国产，也不代表是假洋品牌。买的初期，需要去多找几个牌子的试用装同时测试。教你一眼判断血清的质量淡黄色，透明——2小时以内的国产新生牛血清，胆红素含量较少；金黄色，透明——产下较长时间的新生牛血清，一般超过2小时了；金黄色，不透明——产下几天或更久的小牛血清；淡黄色，带一点微红，透明——等级高的进口胎牛血清...

查看更多

WinSeran细胞培养常见两个问题（抱团+空泡问题）

WinSeran细胞培养常见两个问题（抱团+空泡问题）细胞抱团怎么处理?一些悬浮细胞抱团生长是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15ml离心管中，静置20min左右，小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。细胞内有空泡，是否是正常...

查看更多

如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？

如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？原则上：直接灭菌后丢弃之。当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。1.在无抗生素的培养基...

查看更多

细胞培养中，黑点已经产生了，如何进行处理?

黑点已经产生了，如何进行处理?如果判定黑点是污染，请及时将细胞处理后丢弃。其他情况，可参照以下进行：如果是悬浮细胞：收集细胞上清慢速离心(500-600rpm/min，5-6min)并更换新的培养瓶;如果是贴壁细胞：将细胞用PBS洗2-3遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去PBS，消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1min左右，让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来，去掉低浓度胰酶，然后正常消化细胞，将收集的细胞悬液慢速离心(500-600rpm...

查看更多

27个细胞传代培养常见问题汇总

1、一般拿到细胞后，应该注意什么?收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张)，排除细胞本身污染的情况。2、何时须更换培养基?视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。3、细胞何时进行传代较好?一般情况下细胞生长至*汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜...

查看更多

如何确认细胞交叉污染

交叉污染虽不如微生物污染普遍，但与HELA细胞及其他生长迅速的细胞系间广泛的交叉污染是个明确的问题，会造成严重后果。从声誉好的细胞库获取细胞系、定期检查细胞系性质及采用良好的无菌技术有助于避免交叉污染。通过DNA指纹图谱、核型分析和同位素分析可确认有无交叉污染。血清与培养基通常血清的添加比例为10%，当然也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。在更换血清品牌或者批次时，最好需对血清的品质进行验证，防止对实验造成影响。对于培养基，目前商品化的比较成熟，稳定性也较好。如...

查看更多