MIA PaCa-2 胰腺癌细胞系

背景：

     胰腺癌是第四大致死性肿瘤，预计2030年将位居第二。基于是否可切除，非转移性胰腺癌患者分为三类：1）可切除2）可能切除3）局部进展。根据目前NCCN和ASCO的指南推荐，患者处于可切除状态且无显著升高的CA-19-9、大的原位肿瘤、局部大淋巴结或极其疼痛，应在吉西他滨+卡培他滨或FOLFIRIN OX（5-FU、亚叶酸、奥沙利铂和伊立替康）治疗后直接手术。辅助治疗的作用仍不清楚，但边缘阳性切除尤应考虑采用辅助治疗。FOLFIRINOX是目前可能切除或局部进展的优选新辅助治疗方案。临床研究持续关注可切除肿瘤患者是否应接受术前。我们比较了改良FOLFIRINOX（mFOLFIRINOX）新辅助治疗与吉西他滨辅助治疗（adj-gem）对行切除的胰腺癌患者的临床转归与病理标志。

方法：

本研究回顾性入组了2006年至2017年俄亥俄州立大学患者。虽然认为接受吉西他滨辅助治疗的患者可以通过切除，但机构肿瘤委员会小组规定，接受neo-mFOLFIRINOX治疗的患者分为可切除性（BR）或不可切除性（UR）胰腺癌患者。111例患者接受了adj-gem（平均周期为5.5），52例患者接受了neo-mFOLFIRINOX治疗（平均周期为3.5）。采用Kaplan-Meier模型法计算各自生存率，并用Cox回归及log-rank检验进行了分析。

结果：

      中位随访时间为21.3个月时，neo-mFOLFIRINOX组和adj-gem 组的中位OS分别为 35.4个月和21.8个月（HR 0.56，95% CI，0.37-0.84，p = 0.005）。neo-mFOLFIRINOX组和吉西他滨辅助治疗组的3年OS率分别为46%和 22%（p = 0.001）。neo-mFOLFIRINOX组和adj-gem组的中位无疾病生存期（DFS）分别为18.6个月和12.0个月（HR 0.63，95%CI，0.43-0.93，p = 0.022）。neo-mFOLFIRINOX组和adj-gem组的3年DFS率分别为17%和11%（p = 0.02）。在手术病理标本复查时，与adj-gem组相比，neo-mFOLFIRINOX组具有较低的肿瘤等级、神经浸润和淋巴管浸润率、病理T分期、病理N分期和较少的阳性淋巴结数量，差异具有统计学意义（p < 0.05）。neo-mFOLFIRINOX组中R0切除率比adj-gem组高，但差异无统计学意义（51.9%与40.4，p = 0.2）。两组之间的平均年龄和体能状态相似。

PC-12(高分化)   大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株

PECA 小鼠皮肤鳞状细胞癌

PH 成人急性单核细胞白血病

PK-15 猪肾细胞

Raji 人B淋巴瘤细胞

RAW264.7   小鼠单核细胞

RSC96 大鼠雪旺细胞

Saos-2 人成骨肉瘤细胞

SCL-1 人皮肤鳞癌细胞

SK-BR-3 人乳腺癌传代细胞

SK-OV-3 人卵巢癌细胞

SMMC-7721 人肝癌细胞

SNU-899 上呼吸消化道鳞状细胞癌

SPEC-2 子宫内膜浆液性表面乳头状癌细胞

ST 猪胎睾丸细胞

SU-DHL-6 弥漫性大B细胞淋巴瘤生发中心B细胞型

SV40 MES 13 小鼠肾小球系膜细胞

SV-HUC-1 人正常膀胱上皮细胞

SW480   人结直肠癌细胞

SW620 人结肠腺癌细胞

SW900 肺鳞状细胞癌

T24   人膀胱移行细胞癌细胞

TE-1 人食管癌细胞

THP-1 人急性单核细胞白血病单核细胞株

TM3 小鼠睾丸间质细胞

TPC-1 人甲状腺乳头状癌的细胞系

U118MG 人星形胶质细胞

U266 人骨髓瘤细胞

U87MG  人脑星形胶质母细胞瘤

WiDr 人大肠癌细胞

Yac-1 小鼠淋巴瘤细胞

山羊MSC细胞 山羊骨髓间充质干细胞

山羊关节软骨细胞

MIA PaCa-2 胰腺癌细胞系

原代培养及其操作步骤

原代分离细胞培养是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代细胞培养做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。

1、剪切组织：先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。

2、消化分离：消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。

3、培养：细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。

4、注意事项：

1）无菌操作：细菌或霉菌污染是培养失败的常见原因，必须加强各个环节的无菌操作观念，以预防为主，一旦污染，一般很难消除。

（2）培养液：所用的培养液必须满足细胞生存和生长的必要条件。由于细胞来源的动物种类、组织类型不同，对培养液的要求有一定的差异，必要时可用预实验的方法选择适当的培养液。

（3）小牛血清：小牛血清对于维持培养细胞的生存和促进细胞增殖起着关键性作用。可选择多种不同批号的小牛血清进行小样分析。一旦确定某一厂家的某一批号小牛血清后，就保持应用至实验完成。

（4）胶原酶溶液：必须新鲜配制，贮存时间过长(即使是-20℃低温保存)，也将影响消化效力，导致消化时间过长，细胞损伤增加。

（5）L-谷氨酰胺：几乎所有细胞对谷氨酰胺都有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞会因生长不良而死亡。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，加有谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱贮存两周以上时，就应重新加入原来量的谷氨酰胺。

（6）静置培养：原代细胞在消化分离后，置于CO2培养箱的头24～48h (必要时72h)内，应处于绝对静置状态，切忌不时地取出培养瓶观察生长状况，这将使原代分离细胞难以贴壁，更谈不上伸展和增殖，初学者尤应注意。不必担心培养液中的营养成分会消耗光，在细胞增殖之前对营养的要求并不大。原代培养初期仅加一薄层培养液的目的也在于有利于细胞贴壁伸展。

（7）消化时间：一般消化至肉眼尚可见微小组织颗粒即可，因为此时组织颗粒已经松散，略经吹打即成细胞团或单个细胞，过久的消化往往导致细胞损伤加重，细胞培养成活率降低。

（8）其他生长因子：经过以上处理，一般原代分离细胞培养均可以成功。对于少数特殊类型细胞也可以考虑加一些特殊的生长因子，如胰岛素能促使细胞摄取葡萄糖和氨基酸。另外，内毒素、EGF、FGF等均有促有丝分裂作用，但费用较高。

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