去除无外泌体血清|进口

货号：EXO-FBS-50A-1

品牌：SBI

规格：50ml

当外泌体在1980年被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、肿瘤侵袭等方方面面。有研究表明肿瘤来源的外泌体参与到肿瘤细胞与基底细胞的遗传信息的交换，从而导致大量新生血管的生成，促进了肿瘤的生长与侵袭。

外泌体——基础知识篇

细胞外囊泡（Extracellular Vesicles，EVs）是指细胞主动分泌的具有膜结构的微小囊泡的统称，几乎所有的细胞都会分泌EVs，然而EVs最初被认为是细胞向外排泄的“垃圾"，是细胞移除碎片和清除特定大分子的一种途径。根据大小、生物特性和形成过程的不同，EVs主要分为外泌体（exosomes）、微囊泡（microvesicles）、和凋亡小体（apoptotic bodies）三大类。近十年来，研究学者重新认识了EVs的重要性，越来越多的研究发现EVs可以作为遗传信息的传递者，携带和传递信号分子运输到相邻远处的细胞，从而调节细胞的生理和病理的状态，参与许多疾病的发生发展过程，其中对于外泌体的研究最为火热。

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外泌体——研究思路篇

01外泌体的样本来源

由于研究细胞分泌的外泌体，需要避免培养基中其它外源性外泌体对细胞分泌外泌体的影响，目前采用以下方法获取研究样本：血清饥饿培养、去外泌体血清培养、无血清体系培养、其它样本来源。

01血清饥饿培养

一般是指通过降低培养液中的血清浓度，使所培养的细胞因缺乏血清中的生长因子而不能分裂，这个操作常用来做细胞同步化分裂。常规操作就是在细胞培养至融合度为50-60%左右，撤去含血清的*培养基，更换为基础培养基进行饥饿培养细胞至融合度为80%左右，收获细胞上清进行下游的研究。但血清饥饿培养收获的外泌体量有限且质量较低。

02去外泌体血清培养

为了减少或避免血清饥饿培养对细胞分泌外泌体的影响，去外泌体血清培养细胞成为大多数学者选择的一种方式。去外泌体血清可适用于大部分细胞培养，基本可维持与正常胎牛血清中相同生长速率和形态。在使用各种方法去除胎牛血清中大部分的外泌体后添加至培养基中配制成去外泌体血清*培养基，应用于细胞外泌体的研究。

03无血清体系培养

从饥饿培养到去外泌体血清培养，再到无血清体系培养。这是针对外泌体研究所做出的培养基改善与优化。也让学者们能够了解到细胞培养所需要的营养成分。目前无血清体系的培养基可分为含血小板裂解物（含外泌体）的无血清培养基、配方明确的无血清培养基等，其中配方明确的无血清体系让研究细胞外泌体的结果更加准确。

04其它外泌体样本的来源

除了细胞来源的外泌体样本研究最为广泛，血浆、血清也是多数学者的研究样本，其它的样本包括唾液、脑脊液、乳汁、尿液等生物体液，均可以作为外泌体研究的样本来源。

HeLa 人宫颈癌细胞

143B 人骨肉瘤细胞

293T 人胚肾细胞

A2780 人卵巢癌细胞

A549 人非小细胞肺癌细胞

A673 人尤因肉瘤细胞

AGS 人胃腺癌细胞

BGC823 人胃腺癌细胞(低分化)

C33A 人宫颈癌细胞

CACO2 人结直肠腺癌细胞

COLO205 人结肠癌细胞

DU145 人前列腺癌细胞

ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞

H1650 人非小细胞肺癌细胞

H460 人大细胞肺癌细胞

HACAT 人永生化表皮细胞

HCT116 人结肠癌细胞

HEK-293 人胚肾细胞

HEPG2 人肝癌细胞

HGC-27 人胃癌细胞(未分化)

HT-29 人结肠癌细胞

t24 人膀胱癌细胞

KYSE150 人食道癌细胞

L02(HL7702)(QSG-7701)(7402)(bel7404) 人正常肝细胞

LOVO 人结肠癌细胞

MCF-10A 人正常乳腺上皮细胞

MCF7 人乳腺癌细胞

LX-2 人肝星状细胞

MDA-MB-468 人乳腺癌细胞

MIA Paca2 人胰腺癌细胞

NCI-H1299 人非小细胞肺癌细胞

PANC-1 人胰腺癌细胞

RBE 人肝胆管癌细胞

SAOS-2 人成骨肉瘤细胞

SiHa 人子宫颈鳞癌细胞

NB 4 急性早幼粒细胞白血病细胞

SPC-A-1 人肺腺癌细胞

SW480 人结肠癌细胞

U-87MG 人脑星形胶质母细胞瘤细胞

ZR-75-1 人乳腺癌细胞

SW1116 人结肠腺癌细胞

293A 人胚肾细胞

SGC-7901 人胃腺癌细胞

Ishikawa 人子宫内膜癌细胞

Eca-109 人食管癌细胞

RD-ES 人尤文氏肉瘤

NCI-H1437 人肺癌细胞

HOS 人骨肉瘤细胞

Hela S3 人宫颈癌细胞

ECC1 人宫颈内膜腺癌细胞

SUP-B15 人Ph+急淋白血病细胞系

TF-1 人血液白血病细胞

NCI-H446 人小细胞肺癌细胞

GES-1 人胃正常黏膜上皮细胞

IOSE80 人卵巢正常上皮细胞株

sw-13 人肾上腺皮质小细胞癌细胞

KGN 人卵巢颗粒细胞癌

U937 人组织细胞淋巴瘤细胞

SV-HUC-1 人膀胱上皮永生化细胞

tpc-1 人乳头瘤状甲状腺癌细胞

hela-luci Luciferase稳定表达Hela细胞

colo320 人结肠癌细胞

bxpc-3 人胰腺腺癌细胞

raji 人Burkitt's淋巴瘤细胞

5637 人膀胱癌细胞

chang-liver 人肝细胞(已被hela污染）

a549-gfp gfp标记的A549细胞

hs578.t 人乳腺癌细胞

T24 人膀胱移行细胞癌细胞

K562 人慢性髓系白血病细胞

EH-GB1 人胆囊癌细胞

skov-3 人卵巢腺癌细胞

ECV304 人膀胱癌细胞（T24衍生物）

nci-n87 人胃癌细胞

B-CPAP 人甲状腺癌细胞

NCI-H1975 人非小细胞肺腺癌细胞

HK-2 人肾皮质近曲小管上皮细胞

J82 人膀胱癌细胞

A431 人皮肤鳞癌细胞

MG63 人骨肉瘤细胞

SW48 人结肠癌细胞

ME180 人宫颈表皮样癌

hepaRG-GFP Gfp标记的人肝癌细胞

BEAS-2B 人正常肺上皮细胞

THP-1   人髓系白血病单核细胞

PC-9 人肺癌细胞

Fadu 人咽鳞癌细胞

Huh7 人肝癌细胞

HCCC9810 人肝癌细胞

Jurkat cloneE6-1 人急性T淋巴细胞白血病细胞

KBM-7 人慢性粒细胞白血病细胞

GBC-SD 人胆囊癌细胞

JEKO-1 人套细胞淋巴癌细胞

CAL-27 人口腔鳞癌

DB 弥漫大B细胞淋巴瘤细胞

mp38

nci-h226 人肺鳞癌细胞

hepg2.2.15 人肝癌细胞

SK-BR-3 人乳腺腺癌细胞

SNU-1 人胃癌细胞

su-dhl-6 人B细胞淋巴瘤细胞

HL-60 人早幼粒急性白血病细胞株

nk-92mi 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞

kg-1 人急性骨髓性白血病细胞

nci-h209 人小细胞肺癌细胞

sk-hep-1 人肝癌细胞

sw579 人甲状腺鳞癌细胞

nthy-ori-3-1 人甲状腺正常细胞

bt474 人乳腺导管癌细胞

ncm460 人正常结肠上皮细胞

hmec-1 人微血管内皮细胞

mrc5 人胚肺细胞株

t2 (atcc) 人T2细胞

22rv1 人前列腺癌细胞

hct8 人结直肠腺癌细胞

786-o 人肾透明细胞腺癌细胞

SKOV3-GFP 转染GFP的人卵巢癌细胞

RKO 人结肠癌细胞

calu-1 人肺癌细胞

kb 人口腔表皮样癌细胞

ovcar3 人卵巢腺癌细胞

u937-dc-sign 人组织细胞淋巴瘤细胞

a375 人恶性黑色素瘤瘤株

u2OS 人成骨肉瘤细胞

h69ar 人小细胞肺癌细胞

sk-mel-28 人皮肤恶性黑色素瘤

95D 人高转移肺癌细胞

nci-h226 人肺鳞癌细胞

calu3 人肺腺癌细胞

C666-1 人鼻咽癌细胞

HT1080 人纤维肉瘤细胞

ASPC-1 人胰腺癌细胞

TT 人髓样甲状腺肿瘤细胞

NOZ 人胆囊癌细胞

HCCLM3 人高转移肝癌细胞

mda-mb-453 人乳腺癌细胞

TFK-1 人胆管癌细胞

FHs 74 Int 人小肠上皮细胞

H9胚胎干细胞 人胚胎干细胞

caki-2 人肾透明细胞癌细胞

mda-mb-231 人乳腺癌细胞

pc3 人前列腺细胞

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如何鉴定提取出来的外泌体？

以目前外泌体的分离手段很难获得十分纯净而且单一的外泌体样品，也没有任何一个单一实验可以确定外泌体的存在。根据国际细胞外囊泡协会发表的指导手册《MISEV 2018》，外泌体特征鉴定通过NTA测粒径分布、TEM电镜分析形态、WB检测标志蛋白三项来验证。NTA分析样品中外泌体的粒径分布和颗粒浓度，TEM电子显微镜来观察样品中外泌体的形态特征，WB检测外泌体标志蛋白。

外泌体如何保存？

不同时间、温度的保存对不同的外泌体样本影响不一；如果研究方向为外泌体形态特征、蛋白或其他功能性分析，在分离后新鲜使用为最佳。目前主流的建议是提取出外泌体后最好是新鲜使用，或低温短期保存。

短时间几天内可以放4°C，长时间储存置于-80°C保存。

NTA检测可以进行外泌体定量吗？

NTA是物理方法，基于颗粒的布朗运动，因为不管是脂质体、蛋白，甚至是PBS中的颗粒（部分实验室自行配置的PBS中发现大量颗粒，推荐在外泌体研究中，用VC品牌的PBS（P/N:C3580-0500），避免干扰），都会被软件读取，并不能分辨是否为外泌体。但NTA提供的粒径分布可供判断所提取的内含物是否在外泌体的粒径范围内；另外，在做外泌体分泌的对比实验中，NTA提供的浓度值也可以作为重要的参考数据。

外泌体NTA检测需要多少量？

Zetaview仪器的最佳检测区间是10^7 particles/ml，且有浓度检测下限，为10^5 particles/ml，一般进样量不少于2 ml；

无法准确建议送样量，检测需要量与样本本身浓度有关，样本浓，则用量小，反之则多，根据检测经验，样本取用量一般在2 µl-100 µl不等，取用量大于50 µl时大多由于样本分泌量过低、提取失败或者对样本有过多稀释。

一般建议：送样量不低于30 µl。

外泌体用什么分离方法比较好？

无法明确哪种分离方法比较好，各有千秋，以下列出常用的外泌体分离方法：

超速离心法（差速离心和密度梯度离心）：操作繁琐，耗时长，分离外泌体纯度较高，但得率低，目前分离外泌体主流方法；

尺寸排阻色谱（Size-exclusion chromatography，SEC）：应用填充多孔聚合物微球的柱子，精确分离大小分子，操作简便，耗时短，分离外泌体纯度较高；

聚合物沉淀法：操作简便，耗时短，可能会同时分离非囊泡污染物（包括脂蛋白），分离外泌体纯度较低；

磁珠免疫法：通过特定的抗体组合从样本中捕获不同类型的外泌体，免疫亲和技术具有高特异性、可获得高纯度的外泌体、且不影响外泌体形态完整等优点，是富集表征*的外泌体的优选方法。但是此方法效率低，外泌体内含物的生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验的进行。

 

组合方法：如聚合物沉淀法+SEC (CellGS Exo-spin 外泌体纯化试剂盒）纯化流程温和，无需高速离心，操作简便并且产物纯度高，分离出的外泌体完好无缺，适用于下游功能研究、WB验证、RNA分析等。

 

 

 

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