干细胞专用胎牛血清ES级别
产品名称:干细胞专用
货号:
规格:500ml
品牌:winsera \....
§细胞抱团怎么处理?
一些悬浮细胞抱团生长是正常现象,大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下,很可能会出现部分细胞抱团生长的现象,聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物,殃及周围的悬浮细胞,因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团,可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团,也可以尝试一下方法:将细胞悬液收集到15 ml离心管中,静置20 min左右,小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。
§细胞内有空泡,是否是正常现象?
部分细胞本身存在一定的空泡(如HepG2,Ishikawa及一些耐药株等),这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡,则很可能是细胞状态不佳,可以通过调整血清浓度,控制消化,控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡,且单个细胞内空泡数目偏多,则可能细胞代次较高,细胞老化所致,需更换代次较早的细胞。
§细胞传两代后开始逐渐死亡的原因
很可能是培养体系不适合细胞(未使用推荐的培养体系);或者消化过度,对细胞有严重影响;或者是传代比例不合适(具有密度依赖性的细胞,传代太稀;或者生长较快的细胞,传代较密,细胞严重堆叠生长)。
§细胞生长逐渐变慢是什么原因?
细胞增殖变慢有以下原因:1. 消化过度 2. 传代过密 3.细胞营养不良 4.细胞频繁传代 5.细胞状态不佳或老化 6.细胞存在污染。
§培养细胞时应使用5%或10%CO2?
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。
§CO2培养箱之水盘如何保持清洁?
定期(每周一次)更换水盘里面的水,水盘的水必须使用无菌蒸馏水或无菌去离子,水盘中可添加1%硫酸铜以预防霉菌污染。
§细胞接种密度多少合适?
依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的一个重要原因。按照我们的经验:一般倍增时间24 h内的细胞,传代比率1:6-1:12为宜,倍增时间24-48 h的细胞,传代比率1:3-1:8为宜,倍增时间超过48h的细胞, 传代比率1:2-1:4为宜。因此选择正确的,靠谱的胎牛血清及厂家极其重要↓↓↓↓
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WINSERA®胎牛血清 | 货号 | 规格 | 库存状态 |
优级 | FBS500-WS-002 | 500ML | 现货 |
特级 | FBS500-WP-002 | 500ML | 现货 |
ES级别 | FBS500-WE-002 | 500ML | 现货 |
无外泌体血清 | FBS050-EXO | 500ML | 现货 |
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DECO0119 人髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒
DECO0120 人核糖体蛋白L22(RPL22)ELISA试剂盒
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DECO0138 人异柠檬酸脱氢酶(ICD)ELISA试剂盒
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DECO0140 人抑癌基因SEMA3B ELISA试剂盒
DECO0141 人去甲肾上腺素(NA) ELISA试剂盒
DECO0142 人前列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒
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DECO0146 人可溶性血管细胞粘附因子1(sVCAM-1)ELISA试剂盒
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DECO0149 人单胺氧化酶A(MAOA) ELISA试剂盒
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DECO0153 人麻疹病毒IgM(MV IgM)ELISA试剂盒
DECO0154 人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)ELISA试剂盒
DECO0155 人可溶性转铁蛋白受体1(sTfR1)ELISA试剂盒
DECO0156 人基质裂解素2(ST-2)ELISA试剂盒
DECO0157 人纤维介素蛋白(fgl2)ELISA试剂盒
DECO0158 人埃滋蛋白(Ezrin)ELISA试剂盒
DECO0159 人组织型纤维溶酶激活物(t-PA)ELISA试剂盒
DECO0160 人纤维连接蛋白(FN)ELISA试剂盒
DECO0161 人单纯疱疹病毒(HSV)ELISA试剂盒
DECO0162 人胰岛素自身抗体(IAA)ELISA试剂盒
DECO0163 人内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒
DECO0164 人25羟基维D( 25-OH-D) ELISA试剂盒
DECO0165 人可替丁(Cotinine )ELISA试剂盒
DECO0166 人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒20.如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?
原则上:直接灭菌后丢弃之。
当重要的培养污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
2.分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,霉素b推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。
3.每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
4.确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。
5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
6.重复步骤4。
7.在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。
21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞,是否能以肉眼观察出异状?
不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。
22.支原体污染会对细胞培养有何影响?
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数, 代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。
23. 侦测出细胞株有支原体污染时, 该如何处理?
直接灭菌后丢弃,以避免污染其它细胞株。
24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁?
定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
25.为何培养基保存于4 °C 冰箱中, 颜色会偏暗红色, 且pH值会越来越偏碱性?
培养基保存于4 °C 冰箱中, 培养基内之CO2 会逐渐溢出,造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果,将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时,可以通入无菌过滤之CO2, 以调整pH 值。
26. 各种细胞培养用的dish,flask是否均相同?
不同厂牌的dish 或flask, 其所coating 的polymer 不同, 制造程序亦不同, 虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。
27. 购买之细胞冷冻管经解冻后,为何会发生细胞数目太少之情形?
研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少, 大都是因为离心过程操作上的失误,造成细胞的物理性损伤, 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心, 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因?
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳, 常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。
29. 收到之冷冻管瓶身破裂,瓶盖有裂纹,或瓶盖脱落之原因?
冷冻管瓶盖裂纹,或瓶身破裂,可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当,造成冷冻管裂损,建议使用钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱,乃因热胀冷缩之物理现象,冷冻管有可能因此而造成细胞污染,故冷冻管于放入和取出液氮桶时,均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
30.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后,L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成,而氨对于一些细胞具有毒性。
31.GlutaMAX-I是什么?培养细胞如何利用GlutaMAX-I?这个二肽有多稳定?
GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物,其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽,释放L-谷氨酰胺供利用。
GlutaMAX-I二肽非常稳定,即使在121磅灭菌20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎*降解。
32.什么培养基中可以省去加酚红?
酚红在培养基中用作PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
33.如何用台盼兰计数活细胞?
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升,在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色细胞是死细胞。
34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么?
丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源,尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源,但是,如果没有葡萄糖的话,细胞也可以代谢丙酮酸钠。
35.二价离子抑制蛋白酶活性吗?使用蛋白酶时加入EDTA的目的是什么?
二价离子的确抑制蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制蛋白酶的活性。建议蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。
36.室温下配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用时PH值是多少?
缓冲液PH值随温度变化而变化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃时,不同PH值。
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