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干细胞专用胎牛血清

干细胞专用胎牛血清

产品型号:

所属分类:SIGMA胎牛血清

产品时间:2022-03-01

简要描述:干细胞专用胎牛血清

货号:F8687

规格:500ml
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详细说明:

干细胞专用胎牛血清

产品名称:干细胞专用胎牛血清

货号:SFBS/ST30-2602/sigmaF8687

规格:500ml

品牌:~~~

细胞培养最基本的是做好污染防控,包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。

实验中需保持良好的操作习惯,所用材料的位置摆放要顺手,污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。

※血清与培养基

通常血清的添加比例为10%,当然也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。在更换血清品牌或者批次时,最好需对血清的品质进行验证,防止对实验造成影响。

对于培养基,目前商品化的比较成熟,稳定性也较好。如若需自配培养基时,过滤前搅拌时间不宜过长(培养基中营养丰富,细菌常温下20min就可繁殖一代,其代谢产物会对培养基的品质产生影响)。培养基过滤除菌后,应对培养基进行无菌验证,防止污染。

※细胞培养瓶

目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖,保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。

细胞培养过程中,对于适应能力强的肿瘤细胞,可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293THEK293等细胞,建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。

※细胞传代

正常细胞形态较好,轮廓清晰,边缘透亮,细胞增殖状况良好。当贴壁细胞长到密度90%时,需进行传代。

传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。

干消化法:胰酶浸润后弃去胰酶,待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。

湿消化法:待细胞变圆,肉眼观察下成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬传代。

吹打细胞时,手法要轻柔,避免吹打出气泡,造成细胞因内外压差破裂,同时需避免刮到瓶壁影响细胞的贴壁。

不同细胞的贴壁能力不同,消化时间不同;不同细胞细胞间连接强度不一样,消化时间不同;同一细胞生长状状况不同,消化时间不同。消化时适时观察细胞形态,避免因过度消化影响细胞活性。

传代间隔时间和传代比例因细胞而异。细胞传代过程中,当细胞出现状态不好或者污染时及时弃去细胞,重新复苏。

※细胞冻存与复苏

当细胞生长状况较好或者代数较早时,需及时大量的冻存。

细胞冻存液比例为培养基:血清:DMSO=7:2:1,也可血清:DMSO=9:1。细胞冻存密度通常为1-3×106/ml。细胞冻存采用慢冻方式,减少冰晶形成,避免细胞损伤。通常4℃放置0.5 h-20℃放置2 h-80℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

细胞复苏时升温要快,防止在解冻过程中水分进入细胞,形成冰晶,影响细胞存活。38℃水浴不时摇动,在1分钟内使其完全融化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。

※用真诚感动细胞

俗话说,心诚则灵。对待细胞培养也应如此,“自己要用的细胞自己养",多去观察细胞生长状态。

所谓“知彼知己,百战不殆"。培养细胞需要我们的耐心以及不断的摸索和积累,了解了每种细胞各自的习性后,再“傲娇"的细胞也能在我们的“真诚"下认真“成长"※※※※

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贴壁细胞传代:

1)移弃使用过的细胞培养液。(不要直接倒掉,避免瓶口残留导致易污染)

2)使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次,最后移弃冲洗液。(洗去残留的血清,避免影响胰酶的活性。)

3)以 25 cm2的培养瓶为例,向瓶内加入1ml胰蛋白酶-EDTA(请根据各细胞的指引使用合适的浓度)消化液,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,放到37 ℃ 孵育。通常,几分钟内,会发现胞质回缩、细胞间隙增大,倾斜培养瓶时细胞层能自然流下,此时应加入2-3ml含血清的完全培养液终止消化(细胞解离所需时间请参考各细胞的指引,并建议每隔30秒在显微镜下观察细胞的解离情况)。另外,并不是所有贴壁细胞都适用采用胰蛋白酶进行解离,请根据各细胞的指引选择合适的解离方法。

4)使培养瓶倾斜,吸取培养瓶内液体轻轻冲向原细胞生长表面,重复该动作2-3次,使所有细胞沿瓶底流下,再轻柔地把细胞吹打成单个悬液(吹打过程中应避免气泡的产生)。

PS:对于难消化的细胞,尽量不要通过用力吹打的方式来处理,以免对细胞产生物理损伤。可以先将已经消化的细胞分出来,及时终止消化。然后再对仍然贴壁的细胞进行再次消化。做到分层消化,避免易消化细胞长时间在胰酶消化下受损。

5)把所有的细胞悬液转移到15ml离心管中,800-1000rpm离心3-5分钟后移弃上清。

6)加入新的含血清完全培养液重悬成单细胞悬液。按各细胞指引推荐的传代比例,把细胞悬液均匀分到各培养器皿中,补足新的含血清完全培养液,轻轻摇晃混匀。

7)放到37 ℃ 孵育,第二天显微镜下观察细胞的贴壁情况。

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