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胎牛血清SFBS

胎牛血清SFBS

产品型号:

所属分类:BOVOGEN胎牛血清

产品时间:2022-03-01

简要描述:胎牛血清SFBS,SFBS,Bovogen Biologicals Pty Ltd 由Rick Clements于2001年成立,总部位于澳大利亚墨尔本。

货号:SFBS

规格:500ml

千舍生物开工大吉,干细胞专用,特级胎牛血清*......

详细说明:

胎牛血清SFBS

产品名称:新西兰胎牛血清

货号:SFBS

规格:500ml

品牌:BOVOGEN

细胞培养最基本的是做好污染防控,包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。

实验中需保持良好的操作习惯,所用材料的位置摆放要顺手,污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。

血清与培养基

通常血清的添加比例为10%,当然也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。在更换血清品牌或者批次时,最好需对血清的品质进行验证,防止对实验造成影响。

对于培养基,目前商品化的比较成熟,稳定性也较好。如若需自配培养基时,过滤前搅拌时间不宜过长(培养基中营养丰富,细菌常温下20min就可繁殖一代,其代谢产物会对培养基的品质产生影响)。培养基过滤除菌后,应对培养基进行无菌验证,防止污染。

细胞培养瓶

目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖,保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。

细胞培养过程中,对于适应能力强的肿瘤细胞,可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293THEK293等细胞,建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。

细胞传代

正常细胞形态较好,轮廓清晰,边缘透亮,细胞增殖状况良好。当贴壁细胞长到密度90%时,需进行传代。

传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。

干消化法:胰酶浸润后弃去胰酶,待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。

湿消化法:待细胞变圆,肉眼观察下成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬传代。

吹打细胞时,手法要轻柔,避免吹打出气泡,造成细胞因内外压差破裂,同时需避免刮到瓶壁影响细胞的贴壁。

不同细胞的贴壁能力不同,消化时间不同;不同细胞细胞间连接强度不一样,消化时间不同;同一细胞生长状状况不同,消化时间不同。消化时适时观察细胞形态,避免因过度消化影响细胞活性。

传代间隔时间和传代比例因细胞而异。细胞传代过程中,当细胞出现状态不好或者污染时及时弃去细胞,重新复苏。

细胞冻存与复苏

当细胞生长状况较好或者代数较早时,需及时大量的冻存。

细胞冻存液比例为培养基:血清:DMSO=7:2:1,也可血清:DMSO=9:1。细胞冻存密度通常为1-3×106/ml。细胞冻存采用慢冻方式,减少冰晶形成,避免细胞损伤。通常4℃放置0.5 h-20℃放置2 h-80℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

细胞复苏时升温要快,防止在解冻过程中水分进入细胞,形成冰晶,影响细胞存活。38℃水浴不时摇动,在1分钟内使其*融化,1000rpm离心5min,弃去上清,用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。

用真诚感动细胞

俗话说,心诚则灵。对待细胞培养也应如此,“自己要用的细胞自己养",多去观察细胞生长状态。

所谓“知彼知己,百战不殆"。培养细胞需要我们的耐心以及不断的摸索和积累,了解了每种细胞各自的习性后,再“傲娇"的细胞也能在我们的“真诚"下认真“成长"※※※※

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贴壁细胞传代:

1)移弃使用过的细胞培养液。(不要直接倒掉,避免瓶口残留导致易污染)

2)使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞。从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入冲洗液,以避免搅动细胞层,前后摇晃容器数次,最后移弃冲洗液。(洗去残留的血清,避免影响胰酶的活性。)

3)以 25 cm2的培养瓶为例,向瓶内加入1ml胰蛋白酶-EDTA(请根据各细胞的指引使用合适的浓度)消化液,轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,放到37 ℃ 孵育。通常,几分钟内,会发现胞质回缩、细胞间隙增大,倾斜培养瓶时细胞层能自然流下,此时应加入2-3ml含血清的*培养液终止消化(细胞解离所需时间请参考各细胞的指引,并建议每隔30秒在显微镜下观察细胞的解离情况)。另外,并不是所有贴壁细胞都适用采用胰蛋白酶进行解离,请根据各细胞的指引选择合适的解离方法。

4)使培养瓶倾斜,吸取培养瓶内液体轻轻冲向原细胞生长表面,重复该动作2-3次,使所有细胞沿瓶底流下,再轻柔地把细胞吹打成单个悬液(吹打过程中应避免气泡的产生)。

PS:对于难消化的细胞,尽量不要通过用力吹打的方式来处理,以免对细胞产生物理损伤。可以先将已经消化的细胞分出来,及时终止消化。然后再对仍然贴壁的细胞进行再次消化。做到分层消化,避免易消化细胞长时间在胰酶消化下受损。

5)把所有的细胞悬液转移到15ml离心管中,800-1000rpm离心3-5分钟后移弃上清。

6)加入新的含血清*培养液重悬成单细胞悬液。按各细胞指引推荐的传代比例,把细胞悬液均匀分到各培养器皿中,补足新的含血清*培养液,轻轻摇晃混匀。

7)放到37 ℃ 孵育,第二天显微镜下观察细胞的贴壁情况。

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9、如何区分活细胞和死细胞?

显微镜下观察:活细胞中间透亮,饱满,有光泽,死细胞较暗。也可以通过台盼蓝染色来计算细胞活力。

10、如何用台盼兰计数活细胞?

用无血清培养基把细胞悬液稀释到2002000 /毫升,在0.1 毫升的细胞悬液中加入0.1 毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,因而染成蓝色的细胞是死细胞,注意计数需在加入台盼蓝10min内完成。有细胞计数仪的,可直接用计数仪进行。

11、二价离子抑制胰蛋白酶活性吗?

二价离子的确抑制胰蛋白酶活性。

12、使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?

EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子,以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建议胰蛋白酶处理细胞前,用EDTA清洗细胞,以消除来自培养基中所有的二价离子。

13、可否使用与原先不同的培养基?

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基,若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基,细胞大都无法立即适应,易造成细胞状态不好,最终造成细胞无法存活。

14、可否使用与原先不同的血清种类?

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞无法存活。

15、细胞为何生长不均匀?

细胞传代后放入培养箱没有摇匀,或者放入时摇匀,但在细胞贴壁前,又移动了培养瓶,频繁开关培养箱引起的振动或者培养瓶中培养液过少,培养箱搁板表面不平整,这些因素会导致细胞生长不均匀。

16、购买的细胞死亡或细胞存活率不佳

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳,常见原因可归纳为:培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。运输过程对细胞有严重影响。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后,加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久。

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人肝癌细胞 smmc-7721

人脑胶质瘤 SNB-19

人肝癌细胞 snu-1

人肝癌细胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化细胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤细胞 SW982 [SW-982]

人结肠腺癌细胞 SW1116

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW-13

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW1353

人胰腺癌细胞 SW1990

人结肠腺癌细胞 SW480

人甲状腺癌细胞 SW579

人结直肠腺癌细胞 SW620

人结直肠腺癌细胞+GFP SW620+GFP

人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株 SW620/5FU

人膀胱移行细胞癌 SW780

人膀胱移行细胞癌细胞 T24

人乳腺导管癌细胞 T47D

人胶质母细胞瘤 T98G

人食管癌细胞 TE-1

人食管癌细胞 TE-12

人单核细胞白血病细胞 thp-1

人脑胶质瘤 TJ905

人乳头状甲状腺癌细胞株 TPC-1

人甲状腺癌细胞 TT

人喉癌细胞 TU212

人喉癌细胞 TU-138

人脑星形胶质母细胞瘤 U118MGU-118MG

人成骨肉瘤细胞 U-2 OS

人类星形胶质细胞瘤细胞 U251 MG (KO)

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞 U251 MG/TMZ

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞荧光素酶标记 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤细胞 U266

人脑星形胶质母细胞瘤 U87MG

人脑星形胶质母细胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤细胞 U-937

人膀胱移行细胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌细胞 VCAP

人视网膜神经胶质瘤细胞 WERI-RB-1

人黑素瘤细胞 WM-115

人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1

人正常肝细胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌细胞系+GFP XWLC-05+GFP

人胆囊癌细胞系 ZJU-0430

人胆囊癌细胞系荧光素酶标记 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌细胞 ZR-75-1

17、细胞抱团怎么处理?

一些悬浮细胞抱团生长是正常现象,大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下,很可能会出现部分细胞抱团生长的现象,聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物,殃及周围的悬浮细胞,因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。如果出现了细胞团,可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团,也可以尝试一下方法:将细胞悬液收集到15 ml离心管中,静置20 min左右,小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)

18、细胞内有空泡,是否是正常现象?

部分细胞本身存在一定的空泡(HepG2Ishikawa及一些耐药株等),这个是正常现象。如果只有少数细胞有内出现极少空泡,则很可能是细胞状态不佳,可以通过调整血清浓度,控制消化,控制传代比例及时间等方法来调整细胞状态;如果大部分细胞出现空泡,且单个细胞内空泡数目偏多,则可能细胞代次较高,细胞老化所致,需更换代次较早的细胞。

19、细胞传两代后开始逐渐死亡的原因

很可能是培养体系不适合细胞(未使用推荐的培养体系);或者消化过度,对细胞有严重影响;或者是传代比例不合适(具有密度依赖性的细胞,传代太稀;或者生长较快的细胞,传代较密,细胞严重堆叠生长)

20、细胞生长逐渐变慢是什么原因?

细胞增殖变慢有以下原因:1. 消化过度 2. 传代过密 3.细胞营养不良 4.细胞频繁传代 5.细胞状态不佳或老化 6.细胞存在污染。

21、培养细胞时应使用5%10%CO2?

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。

22CO2培养箱之水盘如何保持清洁?

定期(每周一次)更换水盘里面的水,水盘的水必须使用无菌蒸馏水或无菌去离子,水盘中可添加1%硫酸铜以预防霉菌污染。

23、细胞接种密度多少合适?

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的一个重要原因。按照我们的经验:一般倍增时间24 h内的细胞,传代比率1:6-1:12为宜,倍增时间24-48 h的细胞,传代比率1:3-1:8为宜,倍增时间超过48h的细胞, 传代比率1:2-1:4为宜。

24、培养中常出现一些黑点,是污染吗?

首先肉眼观察培养液是否变浑浊,如果变浑浊,基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊:在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则,是否运动,是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则,做布朗运动,黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的),也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的,也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致,快速移动,很可能是细菌污染。

25、如何预防细胞培养中黑点的产生?

掌握细胞传代的最佳时机,不要细胞长老了再传代;掌握好消化时间,防止消化过度产生细胞碎片;减少血清等试剂的冻融次数;将培养液的PH调到最佳;严格控制水质和器皿的清洁。

26、黑点已经产生了,如何进行处理?

如果判定黑点是污染,请及时将细胞处理后丢弃。其他情况,可参照以下进行:

如果是悬浮细胞:收集细胞上清慢速离心(500-600 rpm/min5-6 min)并更换新的培养瓶;如果是贴壁细胞:将细胞用PBS2-3遍,洗的时候,轻轻拍打培养瓶,让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落,再弃去PBS,消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来,去掉低浓度胰酶,然后正常消化细胞,将收集的细胞悬液慢速离心(500-600 rpm/min5-6 min)并更换新的培养瓶,并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。

27、培养用dish,flask是否相同?

不同厂牌的dishflask,其所coatingpolymer不同,制造程序亦不同,虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dishflask而有显著之生长差异。

千舍生物自有品牌,满足您的各种需求:

WINSERA® Fetal Bovine Serum 胎牛血清目录如下:

WINSERA®胎牛血清

货号

规格

库存状态

优级

FBS500-WS-002

500ML

现货

特级

FBS500-WP-002

500ML

现货

ES级别

FBS500-WE-002

500ML

现货

无外泌体血清

FBS050-EXO

500ML

现货






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