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无外泌体胎牛血清 FBS050-EXO

更新时间:2025-04-21点击次数:83

无外泌体胎牛血清 FBS050-EXO

名称:无外泌体胎牛血清

货号: FBS050-EXO

规格:50ML

品牌:WINSERA

 

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无外泌体血清产品应用:

大多数细胞的生长所需的标准培养基,都需要添加胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)作为其生长所需补充物。但是,FBS 来源于牛血清,其中天然含有大量的包括外泌体(exosome)在内的外源性细胞外囊泡(extracellular vesicles)。exosome 其内含有的蛋白质与核酸分子包括 mRNA、miRNA、rRNA 和 snoRNA 等,exosome 所含成份与其细胞来源密切相关,这也决定了 exosome 的功能特异性。但是,FBS 相关的 RNA 会在分离细胞外膜泡 RNA(exRNA)时一同被分离出来,这会对下游 RNA 分析造成干扰。因此,实验设计过程中采取减少 FBS 源 RNA 干扰的预防措施是非常必要的。

无外泌体血清适用外泌体研究。

 

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外泌体是指包含了复杂 RNA 和蛋白质的小膜泡 (30-150nm),现今,其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。为细胞间通讯的重要媒介,它像一个信使,为细胞与胞外环境传递信息,保障机体的正常工作。

外泌体的分离方法这么多,选择哪种更好?

答:外泌体的分离纯化一直是科研工作者关注的问题,获得高纯度的外泌体对后续的研究至关重要。据了解,目前人们多采用超速离心、免疫磁珠、 超滤、 沉淀或试剂盒等方法实现外泌体的提取分离:

1、 超速离心法(差速离心)超离法是常用的外泌体纯化手段,采用低速离心、高速离心交替进行( 如图所示) ,可分离到大小相近的囊泡颗粒。超离法因操作简单,获得的囊泡数量较多而广受欢迎,但过程比较费时,且回收率不稳定(可能与转子类型有关),纯度也受到质疑;此外,重复离心操作还有可能对囊泡造成损害,从而降低其质量。

2、密度梯度离心在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。通过密度梯度离心,样品中的外泌体将在 1.13-1.19g/ml

的密度范围富集。此法获得的外泌体纯度较高,但步骤繁琐,耗时。

3、超滤离心由于外泌体是一个大小约几十纳米的囊状小体,大于一般蛋白质,利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜对样品进行选择性分离,便可获得外泌体。超滤离心法简单高效,且不影响外泌体的生物活性,是提取细胞外泌体的一种新方法。

4、磁珠免疫法外泌体表面有其特异性标记物(如 CD63、 CD9 蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。磁珠法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点,但是效率低,外泌体生物活性易受 pH 和盐浓度影响,不利于下游实验,难以广泛普及。

5、PEG-base 沉淀法聚乙二醇( PEG)可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀,早先应用于从血清等样本中收集病毒,现在也被用来沉淀外泌体,其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。利用PEG沉淀外泌体存在不少问题:比如纯度和回收率低,杂蛋白较多( 假阳性),颗粒大小不均一,产生难以去除的聚合物,机械力或者吐温-20 等化学添加物将会破坏外泌体等,因此发表文章时易受质疑。

6、 试剂盒提取近几年来,市场上已出现各种商业化的外泌体提取试剂盒,有的是通过特殊设计的过滤器过滤掉杂质成分,有的则采用空间排阻色谱法(SEC)进行分离纯化,也有的则利用化合物沉淀将法外泌体沉淀出来。

 

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