无外泌体胎牛血清 FBS050-EXO|WINSERA

无外泌体胎牛血清 FBS050-EXO|WINSERA

名称：无外泌体胎牛血清

货号： FBS050-EXO

规格：50ML

品牌：WINSERA

在细胞培养实验中，胎牛血清（FBS）一直是不能缺少的营养补充剂。然而，传统FBS中含有大量外泌体，可能干扰实验结果，特别是在干细胞研究、肿瘤微环境分析及外泌体相关实验中。苏州千舍生物科技有限公司推出的无外泌体特级胎牛血清（Exosome-Free FBS），通过超高速离心结合纳米过滤技术，有效去除外泌体，确保实验数据的准确性和可重复性。

关键优势：

高纯度：外泌体去除率>99%，避免外源性RNA、蛋白质干扰

高稳定性：批次间差异极小，适用于长期实验

低内毒素：<1 EU/mL，减少细胞毒性风险

1、培养细胞时，如何去除血清来源的外泌体？    

多数情况下，细胞在体外培时养需要血清，而血清中一般都含有外泌体，为避免血清对细胞外泌体的污染，可采用以下两种方法： （1）将细胞培养用的血清通过100000 g超速离心10h以去除血清外泌体； （2）选择无血清培养基进行细胞培养。  

2、无外泌体血清培养基（或者无血清培养基）在什么时候使用？    

细胞在正常含血清的培养基中培养一定的时间后，细胞融合度约为60%-70%时，移去原有含血清的培养基，换成新鲜的无外泌体血清培养基（或者无血清培养基），继续培养24-48h，细胞融合度达到80%-95%左右时收取上清，该上清液即可用于提取外泌体。   

3、细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取？    会的。在收获细胞时，应确定死亡细胞占比不超过5%。细胞凋亡/死亡过程中会释放大量大小不等的囊泡，它们在外泌体的提取纯化过程中会污染活细胞产生的外泌体。  

4、准备做细胞外泌体Small RNA的NGS测序，初始样品量需要准备多少？    普通肿瘤细胞系推荐使用40mL以上的初始样品量。由于某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，建议先通过10kD超滤柱浓缩，准备40mL以上的浓缩液再进行超速离心分离外泌体，一般需提取到20ng以上的Total RNA。  

5、进行外泌体RNA RT-PCR实验推荐什么内参？    取决于具体样品，可以选择外源添加cel-miR-39-3p，或内源U6、SNORD61、SNORD68、SNORD72作为内参。    

6、提取的外泌体进行Western blot前是否需要加入RIPA试剂裂解？    需要，一般按照1:1的比例加入RIPA试剂。  

7、进行外泌体Western blot鉴定时有无内参蛋白可供选择？    无，该检测属于定性检测，更多的是用等蛋白定量校准样品间的差异。

8、组织细胞外泌体如何提取？    无菌环境下将组织剪成小块（越小越好），然后在无血清的培养基中培养12h；将培养液转移至离心管中，于4℃以3000g离心20 min去除培养液中杂质和细胞碎片，将上清液转移至新的离心管中；先使用0.45μm滤器过滤上清液，接着使用0.2μm滤器过滤上清液，再进行超速离心分离外泌体。有条件的话建议采用Transwell小室培养的方式，效果更佳。    

9、如何鉴定提取的外泌体？     

 通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。在进行Western blot检测时，通常检测外泌体标志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101等），按照国际细胞外囊泡协会的建议为检测2个阳性和1个阴性指标。

10、粘度过大的样品如何处理？    如果样品粘度过大时（因细胞分泌物较多所致），可将样品用1×PBS缓冲液进行等体积稀释。

11、外泌体电镜是不是一定要有膜结构？

 负染电镜结果中外泌体的形态是那种明显的茶托样，边缘有一圈略微更明亮的亮圈。如果结构是没有膜结构的圆球形，很可能是脂蛋白颗粒或者抱团的蛋白质。    

12、分离外泌体前能加RNA保护剂吗？    分离外泌体前的样品不能加入任何RNA保护剂（如Trizol）。