A549/吉西他滨细胞培养技巧

更新时间：2025-04-16

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产品名称：A549/吉西他滨人肺癌吉西他滨耐药株

种属：人

组织来源：肺癌

生长形态：贴壁生长

形态特征：上皮细胞

支原体检测：阴性

细胞背景：该细胞系由D.J.Griad通过肺癌组织移植培养建系，患者为58岁人男性。A549能通过胞苷二磷酸胆碱途径合成含有高含量不饱和脂肪酸的卵磷脂。

培养条件：90%RPMI—1640+10%胎牛血清+100nN吉西他滨

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细胞复苏是细胞培养中绕不过去的基础操作，涉及到将液氮冷冻保存的细胞恢复到适宜的生长状态。

（1）复苏前将生物安全柜或者超净工作台进行紫外灭菌30 min。并将含有10% FBS、1×青链霉素（100×）等的培养基、无菌1×PBS（pH 7.2~7.4）进行37℃预热。

（2）将预热好的培养基提前加入到10 cm培养皿或细胞培养瓶中，并取4 mL培养基加入到15 mL离心管中。

（3）从液氮罐中取出细胞冻存管，应带有防护眼睛和手套。迅速放入盛有37℃的水浴中，并不时摇动，尽快解冻。

（4）肉眼观察全部化冻后，将细胞加入到提前准备好的含有4 mL培养基的15 mL离心管中，并以1000 rpm，离心5 min。用75%酒精擦拭消毒后，移至超净工作台上，去除上清，迅速加入1 mL步骤（1）中的培养基，轻轻吹打重悬细胞，然后将细胞全部转移至10 cm培养皿或细胞培养瓶中。

（5）以上下、左右各轻轻晃动5~10次，进行“十"字法混匀细胞，放置37℃ 5% CO2培养箱中。

（6）次日更换一次培养液，观察细胞状态，再继续培养。

（1）快速解冻：从液氮取出细胞冻存管后，应立即放入37℃水浴锅中，持续摇晃1~2 min直至解冻，以避免细胞死亡。

（2）稀释冷冻保护剂：解冻后可用培养基稀释含有冷冻保护剂（如DMSO）的细胞悬液，以减少其对细胞的毒性。

（3）轻柔处理细胞：在离心和重悬细胞时，应避免剧烈搅拌或离心，以免损伤细胞。

（4）及时换液：复苏后的细胞应及时换液，一般在12~24 h换液，去除死细胞和代谢废物，为细胞提供新鲜的营养物质。

（5）使用优质血清：血清的质量对细胞复苏和生长至关重要，选择内毒素更低、质量稳定的血清可以提高实验成功率。

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