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收集肿瘤细胞外泌体
更新时间:2022-03-28 点击量:1001

外泌体的研究离不开细胞培养。以肿瘤相关外泌体研究为例,目前,收集肿瘤细胞外泌体主要有两种方法:

方法一

使用正常培液养细胞再换无血清培液收外泌体。

方法二

直接使用exosome-free FBS配制培养基用于培养细胞收外泌体。

首先,就是基本的离心条件了,目前超离比较好的就是贝克曼或者日立的了,这两家超离在行业内算是翘楚了。其次就是离心参数了:120000 g,4℃,离心14h,离心结果如图:

11.jpg


1:离心后,血清外泌体会富集在管底和管壁;

2:吸取血清时,只吸取澄清部分的血清,并且远离上图中标记的区域;

3:吸取70-80%的澄清的血清;(注意:动作慢,动作轻)

4:其余的浑浊血清留作正常细胞的的营养物添加使用,避免浪费。

5:如果觉得纯度不够,再把离心后收集的血清做二次超速离心。

6:针对超速离心后的血清,必须进行粒径检测(离心前样品和离心后样品),该数据可以放到文章补充材料中,用来证明无血清外泌体制备成功。