苏州千舍生物教你如何解决“细胞空泡化”

“细胞空泡化”在细胞培养中也是一个常见问题，它的出现原因有多种，实验人员碰到往往会很头疼。

在文章中小给列举出了可能出现这种情况的原因，方便大家进行分析选择解决的方法。

一、可以引起细胞空泡化出现的原因有哪些？

1.细胞老化

原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况，是有些细胞处于终末分化状态，不会再分裂，时间长了就会空泡化而死亡。

传代细胞出现这种状况比较少见，出现的原因一般都是因为细胞传代次数过多，老化严重。

2.PH值

培养液的PH值与细胞正常所需PH值差别太大。

3.胰酶消化

 胰酶消化时间过长，会导致细胞状态受损，有时也会出现这种情况。除此之外，还有一个大家容易忽略的问题,在香港的一家科研机构表明如果消化细胞吹打时力度过大，产生太多气泡，长期存在也会出现这种现象。

4.自噬

细胞缺乏营养导致饥饿诱导形成自噬也会形成空泡化，但是这种空泡在光学显微镜下是看不到的，只有在电镜下才能观察到。

5.细胞代谢

在细胞培养过程中，由于血清浓度不够、药物作用、外界刺激等情况下导致细胞代谢出现问题，内质网应激状况下会出现细胞空泡化的情况。

6.污染

衣原体感染：一旦一些细胞出现空泡化，继续培养，空泡范围会扩大，即使传代后也如此，出现这种情况，细胞基本无法挽救。后来检测发现，此种细胞存在衣原体的感染。

支原体污染：支原体污染在不严重的时候细胞是没有什么明显症状的，而且也无法通过光学显微镜观察到，只有在严重的时候会导致细胞状态变差，出现细胞空泡化的现象，细胞膜上也会出现小黑点附着。

病毒污染：在文献上也有说病毒污染也会导致细胞出现空泡化的情况。

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特级胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖处理胎牛血清，热灭活 SH30068.03HI 、马血清SH30074.03  、乌拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 优等胎牛血清FBS A15-151。

BI优等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES级别胎牛血清 04-002-1A 、

BI 间充质胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC优等胎牛血清 SFBE。

Gemini优等胎牛血清 900-108 、Gemini特级胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

TCB胎牛血清 101ZC。

Sigma 特级胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒装A31608-02、马血清16050-122。

双抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株

HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株

HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株

SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株

MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株

A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株

SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株

SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株

HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株

NCI-H1650 人肺支气管癌细胞

RT4 人膀胱移行细胞乳头瘤 、SK-N-MC 人神经上皮瘤细胞

SK-N-SH 人神经母细胞瘤细胞 、SW982 人滑膜肉瘤细胞

T98G 人胶质母细胞瘤 、U251MG(KO) 人类星形胶质细胞瘤细胞

U266 人骨髓瘤细胞 、VCAP 人前列腺癌细胞

hTERT-HPNE 人胰腺导管细胞 、ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞 、H460 人大细胞肺癌细胞

HACAT 人永生化角质形成细胞 、HCT116 人结肠癌细胞

HEK293 人胚肾细胞  、HEPG2 人肝癌细胞

HGC27 人胃癌细胞(未分化) 、HT-29 人结肠癌细胞

HUVEC 人脐静脉内皮细胞 、KYSE150人食道癌细胞

L02(HL7702)人正常肝细胞   、LOVO 人结肠癌细胞

MCF-10A人正常乳腺上皮细胞 、MCF7人乳腺癌细胞

LX-2 人肝星状细胞 、MDA-MB-468人乳腺癌细胞

二、遇到细胞空泡化我们应该如何解决？

1.如果是因为细胞老化的原因，可以通过复苏代数靠前的细胞进行培养。

2.如果是培养液PH的问题，可以通过更换培养液调整到合适的PH值，再进行培养。

3.在传代时，要选用合适浓度的胰酶和选取适当的消化时间进行消化，在操作时避免吹打太过用力出现太多气泡。

4.要保证细胞培养所需的营养充足，可以通过增加血清浓度和在培养基中加入谷氨酰氨解决。

5.尽量使用质量好和渠道正规的胎牛血清，因为这样的血清营养丰富且外源刺激因子少，可以有效的避免出现这类问题。

6.在细胞培养时要严格进行无菌操作，操作时要规范，减少污染的可能性。可以通过试剂盒检测细胞是否污染，对于已经污染的细胞灭菌后直接处理，避免污染其他细胞。