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苏州千舍生物教你如何选择培养基和血清
发布时间:2020-03-13 点击量:179

苏州千舍生物教你如何选择培养基和血清

细胞培养是实验室里常规基础的实验了,但却不是简单的。别小看细胞培养,这里可蕴含着大学问。有时候细胞状态不好,转染、药筛这些实验根本就没办法做。影响细胞培养的因素很多,让我们先从培养基和血清说起。 

经典的培养基有很多种,GIBCOHyClone、Sigma等。其中DMEM、RPMI-1640、MEM、DMEM/F12都是应用zui广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 

◆ MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的,其中增加了组分的范围及浓度。 

◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。

◆ DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。zui初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要,将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L,这就是大家常说的低糖和高糖了。 

Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特级胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖处理胎牛血清,热灭活 SH30068.03HI 、马血清SH30074.03  、乌拉圭胎牛血清 SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 优等胎牛血清FBS A15-151

BI优等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES级别胎牛血清 04-002-1A 、

BI 间充质胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P 。

NTC优等胎牛血清 SFBE

Gemini优等胎牛血清 900-108 、Gemini特级胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特级胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒装A31608-02、马血清16050-122

双抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株

HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株

HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株

SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株

A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株

MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株

A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株

SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株

SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株

HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株

NCI-H1650 人肺支气管癌细胞

RT4 人膀胱移行细胞乳头瘤 、SK-N-MC 人神经上皮瘤细胞

SK-N-SH 人神经母细胞瘤细胞 、SW982 人滑膜肉瘤细胞

T98G 人胶质母细胞瘤 、U251MG(KO) 人类星形胶质细胞瘤细胞

U266 人骨髓瘤细胞 、VCAP 人前列腺癌细胞

hTERT-HPNE 人胰腺导管细胞 、ES-2 人卵巢透明细胞癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞 、H460 人大细胞肺癌细胞

HACAT 人永生化角质形成细胞 、HCT116 人结肠癌细胞

HEK293 人胚肾细胞  、HEPG2 人肝癌细胞

HGC27 人胃癌细胞(未分化) 、HT-29 人结肠癌细胞

HUVEC 人脐静脉内皮细胞 、KYSE150人食道癌细胞

L02(HL7702)人正常肝细胞   、LOVO 人结肠癌细胞

MCF-10A人正常乳腺上皮细胞 、MCF7人乳腺癌细胞

LX-2 人肝星状细胞 、MDA-MB-468人乳腺癌细胞

◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸,它可广泛应用于各种细胞类型,包括对营养成分要求苛刻的细胞。 

◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的,现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用,得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物,这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 

◆ RPMI-1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的,现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。 

以前大部分实验室都是用干粉培养基,但配制过程就较为繁琐,要溶解、调pH值,过滤,过程中可能会产生一些浓度误差,而且有些实验室的水质并不理想,所以培养的效果会有差异。如果使用液体培养基,这种人为的误差会减少,因为毕竟是大批量工业化生产的,批间差会很小。大家是不是感觉液体培养基会贵很多,以前是这样,但现在非也。HyClone和Invitrogen都在国内建立了液体培养基的生产基地,生产和运输成本大幅降低,所以现在的价格也只是50-60元/500ml,比干粉培养基贵不了多少,而且还帮你省了过滤器和时间。 

血清含有生长因子可促进细胞的繁殖,含有附着因子可促进细胞的贴壁,同时还具有抗胰酶活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。zui常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早,营养物质越丰富,所含抗体也越少,因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。由于疯牛病的原因,到目前为止,我国政府仍然禁止从北美洲、欧洲和日本等地区进口牛血清,因此市面上的牛血清大多来自澳洲、南美洲,或是国产的。  而血清批次间的差别就是不可避免的,这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等,而且与取血动物的来源关系密切。不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。在需要更换时,也要尽量保持与原有的一批血清相似。

现在很多公司都提供血清预留,你一旦选定了某个批次的血清,zui好备足一年的量,这样可以避免很多麻烦。血清固然是细胞培养中不可或缺的成分,但正如上文所说,血清的批间差异大,更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。而血清的供应也是必须要考虑的因素。由于气候或疯牛病的影响,说不定哪天血清就突然没得卖了,那对实验的影响可非同小可。另外,血清的价格也很昂贵,虽说现在也有便宜的国产血清,但是高品质的澳洲血清价格仍旧高。因此,也有一些实验室开始换用无血清培养基。  

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