细胞传代操作步骤如何

一、贴壁细胞传代（以一个T25瓶为例）1、吸出原培养液；2、加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；3、加入1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞，放入培养箱消化；4、消化时间跟据细胞特性有所不同，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，全程不要拍打培养瓶；5、加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱落并在液体里反复吹打使细胞，使之尽量呈单颗细胞的悬浮液，这时可以在显微镜看下；6、收集细胞悬液离心，1...

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如何避免细胞污染，千舍有妙招

1.实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风机运转5-10min再开始实验操作。2.实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于空气的流通；实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。3.每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。4.操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容...

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胎牛血清的内毒素含量多少为宜？

有下列情况者，对血清内毒素应格外留意筛选：1.养干细胞时，干细胞对内毒素非常敏感，如果血清中内毒素≥3EU/ml时，干细胞很容易死亡。很多使用者，在血清在试用前，就通过提早审核该批次《检测报告》，以决定是否入围进行试用。2.养免疫细胞时，过高的内毒素可诱导免疫细胞释放炎症因子，抑制小鼠红细胞集落的形成等。3.基因敲除相关的细胞实验，培养的细胞要尽可能保持其原始状态，任何引导细胞衰老或凋亡的试剂，都会让后续的实验结果“失之毫厘，谬以千里”。在准备血清和其他试剂时，选择极低的内毒...

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WINSERA®胎牛血清有哪些重要指标

胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。2.提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。5.起酸碱度缓冲液作用。6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使...

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如何避免细胞的污染

1.实验进行前，超净台用紫外灯照射30-60min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，并开启超净台风机运转5-10min再开始实验操作。2.实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内；实验用品用完应移出超净台，以利于空气的流通；实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。3.每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。4.操作时小心取用无菌的物品，避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；不要在打开的容器瓶口正上方操作，容...

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细胞不贴壁的原因及解决办法？

细胞培养过程中容易出现这样或那样的问题，这些问题都是在细胞生长方面来说，比如细胞的不贴壁、生长缓慢、生长不好，甚至死亡的原因，这些问题使得细胞研究者很是头疼，下面是针对这些问题的原因和解决方法：一、培养细胞不贴壁可能原因：1.胰蛋白酶消化过度；2.支原体污染；3.培养基pH值过碱（NaHCO3分解）；4.细胞老化；5.接种细胞起始浓度太低或太高。解决方法：1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度；2.分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物；3...

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细胞传代操作步骤

一、贴壁细胞传代（以一个T25瓶为例）1、吸出原培养液；2、加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃；3、加入1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞，放入培养箱消化；4、消化时间跟据细胞特性有所不同，显微镜下看到细胞块中间的细胞明显分离变圆，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，全程不要拍打培养瓶；5、加入3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱落并在液体里反复吹打使细胞，使之尽量呈单颗细胞的悬浮液，这时可以在显微镜看下；6、收集细胞悬液离心，1...

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原代细胞如何复苏？

细胞一般储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。细胞复苏就是要把原本冷冻保存(冻存)着的细胞恢复到一般的生长状态，今天我们来看看原代细胞的复苏步骤。一、检查收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形，若有请立即处理告诉寄方。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于–70°C，隔夜后，移到液氮罐保存)。二、冷冻细胞解冻方法一：1、准备好37度水浴锅，预热至37度；2、准备好T2...

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