人乳腺癌细胞荧光素酶标记，ZR-75-1+luc

细胞代号：ZR-75-1+luc

细胞培养条件：1640含 NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S   

细胞生长形态：贴壁生长

培养基中气泡对细胞贴壁的影响

在培养细胞时，普通手动移液器加细胞液过程可能会由于操作速度过快造成气泡产生，气泡会破坏细胞附着，导致细胞培育的效果不佳，产生误差，所以在移液时需要进行练习，以避免气泡生成，同时注意消除吸头内的空气，最好是使用外置活塞式分液器，因为外置活塞式分液器可以在不产生气泡的情况下转移易气泡液体。

正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。

超净工作台内的无菌工作规范

细胞培养是一项十分严谨且专业的实验过程，超净工作台原理是在特定的空间内，室内空气经预过滤器初滤，由小型离心风机压入静压箱，再经空气高效过滤器二级过滤，从空气高效过滤器出风面吹出的洁净气流具有一定的、均匀的断面风速，可以排除工作区原来的空气，将尘埃颗粒和生物颗粒带走，以形成无菌的高洁净的工作环境。所以实验一般在超净无菌工作台上进行，所以超净工作台一定要保持整洁卫生规范。超净工作台上应该采用从左到右，从洁净的实验空间到放置实验废品的脏污空间摆放。

如果在实验过程中随意摆放过多实验器材，容易阻挡超净工作台的气道流通，形成湍流，容易使污染物进入容器，让细胞受到污染。

正确管理CO₂培养箱

CO₂培养箱是存储细胞和培养细胞生长的实验器材，实验人员在实验过程中难以避免需要摆放细胞培养皿进CO₂培养箱，这个时候就需要注意，实验人员应该避免频繁的开关CO₂培养箱，让箱内的实验环境受到影响无法及时恢复，导致细胞培养生长受到干扰。同时，在CO₂培养箱内摆放的样品需要注意规范好摆放的位置并做好正确的标记，做到培养箱门快开快关，一般的实验室培养箱往往多人合用，建议合用的培养箱配置内外门，大化程度减少开关门对培养箱环境的影响，避免实验样品混淆和交叉污染的风险。

CO₂培养箱的常规维护和消毒

CO₂培养箱需要保持湿润的环境，所以需要定期（1-2周）将盛液盘整体移出，将残留的水清空，用70%的酒精或异丙醇溶液擦拭消毒，待干燥后添加无菌蒸馏水，再放回培养箱内。

CO₂培养箱一般需要1个月进行一次消毒清理，实验人员需要按规范拆除培养箱的搁板、搁架及水盘，将酒精喷洒于布上，再进行腔体的清洁，培养箱内尽量避免死角的存在，擦拭腔体内每个位置，再将移除的配件擦拭清洁后，安装到位。

目前自动化设备已代替人工复杂操作，可通过运行高温消毒程序，有效避免污染发生。

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小鼠黑色素瘤细胞荧光素酶标记 B16-F10+LUC

小鼠结肠癌细胞荧光素酶标记 CT26+LUC

小鼠胶质细胞瘤荧光素酶标记 GL-261+luc

小鼠肝癌细胞荧光素酶标记 HEPA1-6+LUC

小鼠卵巢上皮癌细胞荧光素酶标记 ID8+LUC

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小鼠肺癌细胞荧光素酶标记 LLC+LUC

小鼠结肠癌细胞荧光素酶标记 MC38+LUC

小鼠脑神经瘤细胞荧光素酶标记 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌细胞荧光素酶标记 panc02+LUC

小鼠前列腺癌细胞荧光素酶标记 RM-1+LUC

大鼠脑胶质瘤细胞绿色荧光标记 C6+LUC

细胞复苏

细胞复苏和冻存讲究“慢冻快溶"，复苏时一定要将冻存在液氮或-80℃中凝固的细胞冻存液快速融化至37℃，使胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。

复苏准备

➤打开水浴锅加热至37℃。

➤ 超净台上放好离心管（一般15ml的），细胞培养瓶，移液管，紫外灭菌至少20至30分钟，吹风5至10分钟除去臭氧。

➤37℃预热好要复苏细胞的培养液，也可以不用预热培养液，根据细胞情况选择。

➤向离心管中加约5至10ml培养液，从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞，立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动，待融化后（约2min即可）立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中，800-1000rpm下离心5min，弃上清，加适量*培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中，轻晃使瓶底液体分散均匀，标好细胞名称、代数、复苏日期，显微镜下观察后放入37℃，5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁，换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。

细胞复苏注意事项

➤复苏时动作要快，尽量减少胞内形成冰晶，影响复苏后细胞活率。

➤ 融化时尽量不要碰到管口，以免容易造成污染。

➤若一次性需要复苏细胞很多，可以分批水浴解冻，防止传热不佳使得细胞融化时间延长。

➤若需要同时复苏好几种细胞，提前在离心管和培养瓶上做好标记，或记住自己摆放的位置，不要弄混乱。

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