ARPE-19人视网膜色素上皮细胞

DMEM/F12(1:1)+10% FBS

贴壁

上皮细胞样

细胞培养基本知识

一般拿到细胞后，应该注意什么？

收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各两张），排除细胞本身污染的情况。

02何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定，常规细胞2-3天更换培养基。

03细胞何时进行传代较好？

一般情况下细胞生长至*汇合后就应该传代，所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密（也就是常说的长老了），但有接触抑制的细胞，在汇合前就必须进行传代，这类细胞一般在密度70-80%就进行传代，否则会引起细胞分化。

04贴壁细胞如何进行传代？

去掉原T25培养瓶里面的培养基，T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次；弃PBS，再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞，显微镜下观察，待细胞变圆，细胞间隙明显，部分细胞刚开始脱离瓶壁，加4 ml左右*培养液混匀终止消化，将细胞小心吹打下来，1000 rpm/min室温离心5min；弃上清，细胞沉淀用*培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:2-1:3，1:3-1:6，1:6-1:8），每T25瓶补足培养基至5-6 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。

05悬浮性细胞应如何传代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，将细胞悬液移入离心管中，1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清，细胞沉淀用*培养液重悬，按要求分瓶（视细胞密度而定1:4-1:8），每T25瓶加*培养液至4-5 ml，37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长，此时细胞生长状态良好，当补液时，需避免反复吹打。

06贴壁细胞传代如何使用胰酶？

一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时，易造成培养基中细胞碎片增多，黑渣子增多，常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进行消化，对于难消化的细胞可采用0.25%胰酶进行消化，细胞密度过高超过80%时，采用分步消化法。胰酶储存在–20°C，解冻在4°C进行，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20°C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。

07如何控制胰酶消化时间？

胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤：消化过度细胞碎片增多，黑渣子增多，细胞会成片脱落，严重影响细胞活性，并有部分细胞漂浮，随弃去的胰酶流失；消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下，反复吹打同样也会损伤细胞活性。

不同细胞对消化液的敏感性不同，胰酶消化的时间也会有差异。胰酶消化时间与胰酶的浓度，是否含EDTA，胰酶的储存时间，胰酶的储存温度，是否反复冻融，消化加入的胰酶体积，消化温度及细胞的密度有关。消化对于新购买的细胞，建议客户先用低浓度的胰酶仔细去摸索一下消化时间，可每隔1分钟镜下观察细胞是否变圆，记录最佳消化时间，下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。

人多发性骨髓瘤细胞 MM.1R

人多发性骨髓瘤细胞 MM.1S

人急性淋巴母细胞白血病细胞 MOLT-4

人胚肺成纤维细胞 MRC-5（有限细胞系）

人急性淋巴母细胞白血病细胞 MT-4

人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞 MUM2B

人前B急性淋巴细胞白血病细胞 NALM-6

人畸胎癌细胞 NCCIT

人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299

人肺腺癌细胞 NCI-H1395

人肺癌细胞 NCI-H1437

人非小细胞肺腺癌细胞 NCI-H157

人肺支气管癌细胞 NCI-H1650[H1650]（MKN-1）

人肺癌细胞 NCI-H1703

人肺癌细胞 NCI-H1944

人肺腺癌细胞 NCI-H1975

人肺癌细胞 NCI-H2126

人肺鳞癌细胞 NCI-H226

人肺癌细胞 NCI-H23

人肺癌细胞(淋巴结转移) NCI-H292

人肾上腺皮质细腺癌细胞 NCI-H295R

人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358

人小细胞肺癌细胞 NCI-H446

人大细胞肺癌细胞 NCI-H460 [H460]

人大细胞肺癌细胞 NCI-H661[h661]

人胃癌细胞 NCI-N87

人胃癌细胞荧光素酶标记 NCI-N87+LUC

人胆囊癌细胞 NOZ

人肾癌细胞 OS-RC-2

人卵巢腺癌细胞 OVCAR-3

人结直肠癌细胞 P53R [JHU-56]  

人胰腺癌细胞 Panc 03.27

人胰腺癌上皮细胞 Panc 05.04

人胰腺癌细胞 PANC-1

人胰腺癌细胞吉西他滨耐药株 PANC-1/GEM

人胰腺癌细胞 PANC10.05

人胰腺癌细胞 PATU8988t（PATU8988）

人胰腺癌细胞 PATU8988S

人前列腺癌 PC-3

人肺癌细胞 pc-9

人胰腺导管腺癌细胞 PL45

人肝癌细胞 PLC/PRF/5

人胚肾细胞 ProPakA.6

人正常肝细胞 QSG-7701

人淋巴瘤细胞 Raji

人B淋巴瘤细胞 RAMOS RA1

人肝胆管癌细胞 RBE

人横纹肌肉瘤细胞 RD

人急性非B非T淋巴细胞白血病细胞 REH

人子宫内膜癌细胞 RL95-2

人多发性骨髓瘤细胞 RPMI8226

人结肠腺癌细胞 RKO

人膀胱移行细胞乳头瘤 RT4

人前列腺正常细胞 RWPE-1

人前列腺正常细胞 RWPE-2

人小细胞肺癌 SBC-2

人膀胱鳞癌细胞 SCaBER

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染突变型

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染野生型

人子宫颈鳞癌细胞 SIHa

人乳腺癌细胞 SK-BR-3

人乳腺癌细胞 SK-BR-3+IUC

人肝腹水腺癌细胞 SK-HEP-1

人低分化肺腺癌细胞 SK-LU-1

人皮肤黑色素瘤细胞 SK-MEL-2

人皮肤黑色素瘤细胞荧光素酶标记 SK-MEL-2+LUC

人肺鳞癌细胞 SK-MES-1

人神经上皮瘤细胞 SK-N-MC

人肾母细胞瘤细胞 SK-NEP-1

人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH

人卵巢癌细胞 SK-OV-3

人卵巢癌细胞荧光素酶标记 SK-OV-3+LUC

人肝癌细胞 smmc-7721

人脑胶质瘤 SNB-19

人肝癌细胞 snu-1

人肝癌细胞 Snu-182

人膀胱上皮永生化细胞 sv-huc-1

人滑膜肉瘤细胞 SW982 [SW-982]

人结肠腺癌细胞 SW1116

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW-13

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW1353

人胰腺癌细胞 SW1990

人结肠腺癌细胞 SW480

人甲状腺癌细胞 SW579

人结直肠腺癌细胞 SW620

人结直肠腺癌细胞+GFP SW620+GFP

142140210 SW620/5FU

人膀胱移行细胞癌 SW780

人膀胱移行细胞癌细胞 T24

人乳腺导管癌细胞 T47D

人胶质母细胞瘤 T98G

人食管癌细胞 TE-1

人食管癌细胞 TE-12

人单核细胞白血病细胞 thp-1

人脑胶质瘤 TJ905

人乳头状甲状腺癌细胞株 TPC-1

人甲状腺癌细胞 TT

人喉癌细胞 TU212

人喉癌细胞 TU-138

人脑星形胶质母细胞瘤 U118MG（U-118MG）

人成骨肉瘤细胞 U-2 OS

人类星形胶质细胞瘤细胞 U251 MG (KO)

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞 U251 MG/TMZ

人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞荧光素酶标记 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人骨髓瘤细胞 U266

人脑星形胶质母细胞瘤 U87MG

人脑星形胶质母细胞瘤+RFP U87MG+RFP

人淋巴瘤细胞 U-937

人膀胱移行细胞癌 UM-UC-3

人前列腺癌细胞 VCAP

人视网膜神经胶质瘤细胞 WERI-RB-1

人黑素瘤细胞 WM-115

人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1

人正常肝细胞 WRL68

云南宣威人肺腺癌细胞系+GFP XWLC-05+GFP

人胆囊癌细胞系 ZJU-0430

人胆囊癌细胞系荧光素酶标记 ZJU-0430+LUC

人乳腺癌细胞 ZR-75-1

ARPE-19人视网膜色素上皮细胞

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的 重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细 胞群，在条件适宜下可生活 2－3 周，多用做原代培养，难以长期生存。

巨噬细胞也建有无限细胞系，大多来自小鼠，如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等，均获恶性，培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能，易于传代和瓶壁分离，但难 以建株。

培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞， 以小鼠腹腔取材法最为实用， 其法如下：1、实验前三天，向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 lml（勿注入肠内！，以 ） 刺流产生大量的巨噬细胞。

2、引颈处死小鼠。

3、手提鼠尾将其全浸入 70%乙醇中 3－5 秒。

4、置动物于解剖台，用针头固定四肢，持镊撕开腹部皮肤，但勿伤及腹膜壁， 把皮肤拉向上下两侧，暴露出腹膜壁。

5、用 70%酒精擦洗腹膜壁，注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中，同时用手指从 两侧压揉腹膜壁，使液体在腹腔内流动。

6、 用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧． 使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。

7、小心拔出针头，把液体注入离心管。

8、4℃下 250g 离心 10 分钟后，去上清，加 10ml Eagle 培养基。

9、计数细胞。每只鼠可产生 20 一 30×106 细胞，其中 90%为巨噬细胞。

10、以 3×105 个贴附细胞/平方厘米接种。

11、接种数小时后，除去培养液，可去除其它白细胞，纯化培养细胞，用 Eagle 液冲洗 1 一 2 次，再加新 Eagle 培养液置 CO2 温箱中。

猪肾细胞系 LLC-PK-1 DMEM+10%FBS+1%P/S   贴壁生长

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猪鼻甲黏膜成纤维细胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 贴壁生长

猪髋动脉内皮细胞 PIEC 1640+10%FBS+1%P/S 贴壁生长

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