HFL1人胚肺成纤维细胞
F12K+10% FBS
贴壁
成纤维细胞样
细胞培养基本知识
一般拿到细胞后,应该注意什么?
收到细胞先不开盖,用酒精将整个细胞瓶外壁进行消毒,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各两张),排除细胞本身污染的情况。
02何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定,常规细胞2-3天更换培养基。
03细胞何时进行传代较好?
一般情况下细胞生长至*汇合后就应该传代,所有细胞生长都有一个要求不宜生长过密(也就是常说的长老了),但有接触抑制的细胞,在汇合前就必须进行传代,这类细胞一般在密度70-80%就进行传代,否则会引起细胞分化。
04贴壁细胞如何进行传代?
去掉原T25培养瓶里面的培养基,T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;弃PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化细胞,显微镜下观察,待细胞变圆,细胞间隙明显,部分细胞刚开始脱离瓶壁,加4 ml左右*培养液混匀终止消化,将细胞小心吹打下来,1000 rpm/min室温离心5min;弃上清,细胞沉淀用*培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶补足培养基至5-6 ml,37℃、5%CO2孵箱培养。
05悬浮性细胞应如何传代处理?
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清,细胞沉淀用*培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加*培养液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良好,当补液时,需避免反复吹打。
06贴壁细胞传代如何使用胰酶?
一般使用trypsin-EDTA浓度为0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液浓度过高时,易造成培养基中细胞碎片增多,黑渣子增多,常规细胞传代时建议用0.05%的胰酶进行消化,对于难消化的细胞可采用0.25%胰酶进行消化,细胞密度过高超过80%时,采用分步消化法。胰酶储存在–20°C,解冻在4°C进行,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于–20°C,避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低,并可减少污染之机会。
07如何控制胰酶消化时间?
胰酶消化的程度是细胞培养中的一个关键步骤:消化过度细胞碎片增多,黑渣子增多,细胞会成片脱落,严重影响细胞活性,并有部分细胞漂浮,随弃去的胰酶流失;消化不足则细胞难于从瓶壁上吹下,反复吹打同样也会损伤细胞活性。
不同细胞对消化液的敏感性不同,胰酶消化的时间也会有差异。胰酶消化时间与胰酶的浓度,是否含EDTA,胰酶的储存时间,胰酶的储存温度,是否反复冻融,消化加入的胰酶体积,消化温度及细胞的密度有关。消化对于新购买的细胞,建议客户先用低浓度的胰酶仔细去摸索一下消化时间,可每隔1分钟镜下观察细胞是否变圆,记录最佳消化时间,下一次操作参考之前的记录来控制时间即可。
人多发性骨髓瘤细胞 MM.1R
人多发性骨髓瘤细胞 MM.1S
人急性淋巴母细胞白血病细胞 MOLT-4
人胚肺成纤维细胞 MRC-5(有限细胞系)
人急性淋巴母细胞白血病细胞 MT-4
人侵袭性脉络膜黑色素瘤细胞 MUM2B
人前B急性淋巴细胞白血病细胞 NALM-6
人畸胎癌细胞 NCCIT
人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299
人肺腺癌细胞 NCI-H1395
人肺癌细胞 NCI-H1437
人非小细胞肺腺癌细胞 NCI-H157
人肺支气管癌细胞 NCI-H1650[H1650](MKN-1)
人肺癌细胞 NCI-H1703
人肺癌细胞 NCI-H1944
人肺腺癌细胞 NCI-H1975
人肺癌细胞 NCI-H2126
人肺鳞癌细胞 NCI-H226
人肺癌细胞 NCI-H23
人肺癌细胞(淋巴结转移) NCI-H292
人肾上腺皮质细腺癌细胞 NCI-H295R
人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358
人小细胞肺癌细胞 NCI-H446
人大细胞肺癌细胞 NCI-H460 [H460]
人大细胞肺癌细胞 NCI-H661[h661]
人胃癌细胞 NCI-N87
人胃癌细胞荧光素酶标记 NCI-N87+LUC
人胆囊癌细胞 NOZ
人肾癌细胞 OS-RC-2
人卵巢腺癌细胞 OVCAR-3
人结直肠癌细胞 P53R [JHU-56]
人胰腺癌细胞 Panc 03.27
人胰腺癌上皮细胞 Panc 05.04
人胰腺癌细胞 PANC-1
人胰腺癌细胞吉西他滨耐药株 PANC-1/GEM
人胰腺癌细胞 PANC10.05
人胰腺癌细胞 PATU8988t(PATU8988)
人胰腺癌细胞 PATU8988S
人前列腺癌 PC-3
人肺癌细胞 pc-9
人胰腺导管腺癌细胞 PL45
人肝癌细胞 PLC/PRF/5
人胚肾细胞 ProPakA.6
人正常肝细胞 QSG-7701
人淋巴瘤细胞 Raji
人B淋巴瘤细胞 RAMOS RA1
人肝胆管癌细胞 RBE
人横纹肌肉瘤细胞 RD
人急性非B非T淋巴细胞白血病细胞 REH
人子宫内膜癌细胞 RL95-2
人多发性骨髓瘤细胞 RPMI8226
人结肠腺癌细胞 RKO
人膀胱移行细胞乳头瘤 RT4
人前列腺正常细胞 RWPE-1
人前列腺正常细胞 RWPE-2
人小细胞肺癌 SBC-2
人膀胱鳞癌细胞 SCaBER
人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y
人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染突变型
人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染野生型
人子宫颈鳞癌细胞 SIHa
人乳腺癌细胞 SK-BR-3
人乳腺癌细胞 SK-BR-3+IUC
人肝腹水腺癌细胞 SK-HEP-1
人低分化肺腺癌细胞 SK-LU-1
人皮肤黑色素瘤细胞 SK-MEL-2
人皮肤黑色素瘤细胞荧光素酶标记 SK-MEL-2+LUC
人肺鳞癌细胞 SK-MES-1
人神经上皮瘤细胞 SK-N-MC
人肾母细胞瘤细胞 SK-NEP-1
人神经母细胞瘤细胞 SK-N-SH
人卵巢癌细胞 SK-OV-3
人卵巢癌细胞荧光素酶标记 SK-OV-3+LUC
人肝癌细胞 smmc-7721
人脑胶质瘤 SNB-19
人肝癌细胞 snu-1
人肝癌细胞 Snu-182
人膀胱上皮永生化细胞 sv-huc-1
人滑膜肉瘤细胞 SW982 [SW-982]
人结肠腺癌细胞 SW1116
人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW-13
人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW1353
人胰腺癌细胞 SW1990
人结肠腺癌细胞 SW480
人甲状腺癌细胞 SW579
人结直肠腺癌细胞 SW620
人结直肠腺癌细胞+GFP SW620+GFP
142140210 SW620/5FU
人膀胱移行细胞癌 SW780
人膀胱移行细胞癌细胞 T24
人乳腺导管癌细胞 T47D
人胶质母细胞瘤 T98G
人食管癌细胞 TE-1
人食管癌细胞 TE-12
人单核细胞白血病细胞 thp-1
人脑胶质瘤 TJ905
人乳头状甲状腺癌细胞株 TPC-1
人甲状腺癌细胞 TT
人喉癌细胞 TU212
人喉癌细胞 TU-138
人脑星形胶质母细胞瘤 U118MG(U-118MG)
人成骨肉瘤细胞 U-2 OS
人类星形胶质细胞瘤细胞 U251 MG (KO)
人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞 U251 MG/TMZ
人类星形胶质瘤耐替莫唑胺细胞荧光素酶标记 U251 MG/TMZ+LUC(3000)
人骨髓瘤细胞 U266
人脑星形胶质母细胞瘤 U87MG
人脑星形胶质母细胞瘤+RFP U87MG+RFP
人淋巴瘤细胞 U-937
人膀胱移行细胞癌 UM-UC-3
人前列腺癌细胞 VCAP
人视网膜神经胶质瘤细胞 WERI-RB-1
人黑素瘤细胞 WM-115
人正常前列腺基质永生化细胞 WPMY-1
人正常肝细胞 WRL68
云南宣威人肺腺癌细胞系+GFP XWLC-05+GFP
人胆囊癌细胞系 ZJU-0430
人胆囊癌细胞系荧光素酶标记 ZJU-0430+LUC
人乳腺癌细胞 ZR-75-1
HFL1人胚肺成纤维细胞
巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的 重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细 胞群,在条件适宜下可生活 2-3 周,多用做原代培养,难以长期生存。
巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如 P331、S774A.1、RAW309Cr.l 等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难 以建株。
培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞, 以小鼠腹腔取材法最为实用, 其法如下:1、实验前三天,向小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤 lml(勿注入肠内!,以 ) 刺流产生大量的巨噬细胞。
2、引颈处死小鼠。
3、手提鼠尾将其全浸入 70%乙醇中 3-5 秒。
4、置动物于解剖台,用针头固定四肢,持镊撕开腹部皮肤,但勿伤及腹膜壁, 把皮肤拉向上下两侧,暴露出腹膜壁。
5、用 70%酒精擦洗腹膜壁,注射器吸 10ml Eagle 液注入腹腔中,同时用手指从 两侧压揉腹膜壁,使液体在腹腔内流动。
6、 用针头轻挑起腹壁并微倾向一侧. 使腹腔中液体集中于针头下吸取入针管内。
7、小心拔出针头,把液体注入离心管。
8、4℃下 250g 离心 10 分钟后,去上清,加 10ml Eagle 培养基。
9、计数细胞。每只鼠可产生 20 一 30×106 细胞,其中 90%为巨噬细胞。
10、以 3×105 个贴附细胞/平方厘米接种。
11、接种数小时后,除去培养液,可去除其它白细胞,纯化培养细胞,用 Eagle 液冲洗 1 一 2 次,再加新 Eagle 培养液置 CO2 温箱中。
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