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非洲绿猴肾细胞VERO

非洲绿猴肾细胞VERO

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所属分类:其他细胞

产品时间:2022-04-27

简要描述:非洲绿猴肾细胞VERO
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详细说明:

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非洲绿猴肾细胞VERO

MEM+10%FBS+1%P/S

贴壁生长


细胞死亡及生长异常

1、首先讲一下细胞生长缓慢的原因:

a)更换了血清或者培养基,细胞需要一段时间适应一下;

b)由于细胞的特殊种类,培养基中缺少某些生长因子;

c)培养基中有少量真菌或者细菌污染;

d)传代的时候细胞密度过低;

e)细胞状态老化;

f)支原体污染。

2、解决上述问题的方法:

a)如果实验室没有某种细胞最适宜的培养基,可以先用原培养条件冻存一些,然后逐渐增加新的培养基比例,25%50%75%100%,传代3-5次后,让细胞慢慢适应。

b)判断是不是培养基发生污染,可以先不加抗生素,观察细胞状态。

c)增加细胞的接种密度。

d)发现细胞老化的时候,及时更换新的细胞。

e)如果怀疑是支原体污染,一定要隔离疑似污染的培养皿,及时清洁消毒孵箱。

3、造成细胞死亡的原因:

a)细胞消化过度;

b)没有及时换液,营养成分消耗殆尽;

c)如果前一天细胞的状态很好,换液之后就全死了,应该考虑是否是培养基或者血清的问题。

4、如何判定细胞是否发生支原体污染:可以选用直接培养法、荧光染色或PCR方法检测,比较常用的是PCR。当细胞发生支原体污染时,原则上是能够去除支原体的,但是整个过程耗时耗力,还要考验个人操作能力。所以如果不是处于细胞存量很少的情况下,建议发现污染时立刻弃掉,重新培养。

5、如果孵箱中只是某种细胞持续性大量死亡,而其他细胞状态都没问题的话,基本上可以确定就是孵箱存在特异性感染这类细胞的真菌或细菌,遇到这种情况,小六儿也不知道该怎么做,只能是先停一段时间看看。。。。。。

5、其他注意事项:每个星期都要更换孵箱底盘中的水(紫外照射后超纯水);每两周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新洁尔灭擦拭一遍(都用超纯水配制);可以在孵箱底部放一个烧杯,里面放入饱和硫酸铜,可以抑制霉菌生长。不过也有人说硫酸铜会改变孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情况很严重,建议不要使用

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非洲绿猴肾细胞VERO

细胞复苏

细胞复苏和冻存讲究“慢冻快溶",复苏时一定要将冻存在液氮或-80℃中凝固的细胞冻存液快速融化至37℃,使胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

复苏准备

➤打开水浴锅加热至37℃。

➤ 超净台上放好离心管(一般15ml的),细胞培养瓶,移液管,紫外灭菌至少2030分钟,吹风510分钟除去臭氧。

37℃预热好要复苏细胞的培养液,也可以不用预热培养液,根据细胞情况选择。

➤向离心管中加约510ml培养液,从液氮罐或-80℃中取出冻存细胞,立即将冻存管放入37℃水浴中并轻轻摇动,待融化后(约2min即可)立即将解冻的细胞转移至含培养液的离心管中,800-1000rpm下离心5min,弃上清,加适量完全培养液轻轻吹打重悬细胞后转移至细胞培养瓶中,轻晃使瓶底液体分散均匀,标好细胞名称、代数、复苏日期,显微镜下观察后放入37℃,5%CO2培养箱中。一般贴壁细胞过夜即可贴壁,换液和传代时间根据不同细胞生长情况而定。

细胞复苏注意事项

➤复苏时动作要快,尽量减少胞内形成冰晶,影响复苏后细胞活率。

➤ 融化时尽量不要碰到管口,以免容易造成污染。

➤若一次性需要复苏细胞很多,可以分批水浴解冻,防止传热不佳使得细胞融化时间延长。

➤若需要同时复苏好几种细胞,提前在离心管和培养瓶上做好标记,或记住自己摆放的位置,不要弄混乱。







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