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mda-mb-231 人乳腺癌细胞

mda-mb-231 人乳腺癌细胞

产品型号:

所属分类:细胞系

产品时间:2022-04-25

简要描述:mda-mb-231 人乳腺癌细胞
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详细说明:

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mda-mb-231 人乳腺癌细胞

L-15+10% FBS 

贴壁 

上皮细胞样


细胞传代

18.细胞传代的方法都有哪些?

根据不同的细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长的细胞用直接吹打即可传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心分离后传代,或用自然沉降法吸除上清后,再吹打。

19.原代培养的传代应注意的问题?

细胞没有生长到足以覆盖瓶底壁的大部分表面以前,不要急于传代;原代培养时细胞多为混杂生长,不同的细胞有不同的消化时间,因此要根据需要注意观察及时处理,并根据不同细胞对胰蛋白酶的耐受时间而分离和纯化所需要的细胞;

吹打细胞时动作要轻巧尽可能减少对细胞的损伤;传代时细胞接种数量要多一些,使细胞能尽快适应新环境而利于细胞生存和增值;随消化分离而脱落的组织块也可一并传入新的培养瓶。

20.使用胰蛋白酶时加入EDTA的目的?应如何处理?

EDTA作用较胰蛋白酶缓和,主要作用在于能从组织生存环境中吸取Ca2+、Mg2+,这些离子是维持组织完整的重要因素。但EDTA单独使用不能使细胞完全分散,因而常与胰蛋白酶按不同比例混合使用,效果较好。常用比例为1:1或者2份EDTA:1份胰蛋白酶。EDTA的工作液浓度为0.02%,用不含Ca2+、Mg2+的BSS配置。如果使用EDTA,在终止消化前,需用缓冲液将消化液清除后才能加培养液。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于 –20 ℃,避免反复冷冻解冻造成胰蛋白酶的活性降低,并可减少污染的机会。

21.欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

欲回收动物细胞,其离心速率一般为800~1000 rpm,5~10 分钟,过高的转速,将造成细胞死亡。

22.细胞的接种密度为何?

依照细胞株基本数据上的接种密度或稀释分盘的比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长的重要原因之一。

23.细胞交叉污染的可能原因?

多种细胞系进行维持传代操作时,各细胞系所需的器材和溶液没有严格分开,往往会使一种细胞被另一种细胞污染。

细胞冻存

24.冷冻培养基为什么要加DMSO?

因为细胞在不加任何保护剂的情况下直接冻存时,细胞内外的水分都会很快形成冰晶,冰晶的形成将造成细胞损伤,还可引起细胞的的死亡。目前多采用甘油和DMSO做保护剂。这两种细胞无明显毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞,可以使冰点下降,提高包膜对水的通透性。

25.DMSO 的等级和无菌过滤的方式为何?

冷冻保存使用的 DMSO 等级,必须为 Tissue culture grade 的 DMSO,其本身即为无菌状况,第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于 4 ℃,避免反复冷冻解冻造成 DMSO 的裂解而释出有害物质,并可减少污染的机会。若要过滤 DMSO,则须使用耐 DMSO 的 Nylon 材质滤膜。

26.欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

冷冻管内细胞数目一般为 1x106 cells/ml vial,融合瘤细胞则以 5x106 cells/ml vial 为宜。

27.冷冻保存细胞的方法?

冷冻保存方法一:冷冻管置于 4 ℃ 30~60 分钟 →-20 ℃ 30 分钟 → -80 ℃ 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽 vapor phase 长期储存。

冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序的可程序降温机中每分钟降 1~3 ℃ 至 –80 ℃ 以下, 再放入液氮槽 vapor phase 长期储存。–20 ℃ 不可超过 1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入 –80 ℃ 冰箱中,存活率稍微降低一些。

28.细胞冻存太多会不会浪费?

每一种细胞系都应有充足的冻存储备,防止由于细胞污染等因素造成的细胞系的绝种,而且每一批次培养的细胞状态都不同,应该挑选几个状态较好的批次冻存保种。另外二倍体细胞等有限细胞系如果暂时不用最好冻存以免传代太多,造成细胞衰老或者发生改变。

人原代乳腺癌成纤维细胞永生化

人原代软骨细胞永生化

人脐静脉内皮原代细胞+GFP 原代细胞+GFP

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染突变型

人神经母细胞瘤细胞 sh-sy5y转染野生型

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mda-mb-231 人乳腺癌细胞

01冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后,须立即放入37 °C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

注:操作时戴好手套,防止冻伤;带上防护眼镜可以防止液氮罐里刚刚拿出来的管子液氮爆炸……

复苏过程应快融,目的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重结晶。冻存细胞从液氮中取出后,立即放入37℃水浴中,轻轻摇动冷冻管,使其在1 分钟内全部融化(不要超过3 分钟)。解冻后的细胞可以直接接种到含有完全培养液的细胞培养瓶中直接进行培养,24小时后再用新鲜完全培养液替换旧培养液,以去除DMSO。如果细胞对冷冻保护剂特别敏感,解冻后的细胞应先通过离心去除冷冻保护剂,然后再接种到含完全生长培养液的培养瓶中。

02细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,可直接放入10-15ml新鲜培养基,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

03细胞培养时能否更换培养基种类
首先得确定现在用的培养基是否适合您的细胞生长。细胞培养过程中,细胞增殖和形态正常的情况下最好不要更换培养基,细胞都有各自适应的培养基,更换培养条件,细胞可能无法快速适应,导致细胞死亡。若必须更换,可尝试半换,让细胞逐渐适应新的培养基。

更换培养基的方法:如果是贴壁生长的细胞, 一般可以直接把培养液吸掉, 再加入新的。加的时候注意不要对着长细胞的那一面。如果是悬浮型的, 就需要低速离心 (把所有的细胞和培养液转移到离心管里, 或有些离心机配有直接离心细胞培养皿的装置), 然后再吸掉上清液。加入新的培养液使细胞重新悬浮。

04细胞培养时能否更换胎牛血清
首先要确定更换胎牛血清的理由,如果细胞培养无异常的话,不建议随意更换不同品牌和来源的胎牛血清。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的来源(血源地)和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同地域和等级的血清,在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会造成细胞死亡。如果是使用的胎牛血清出现了问题,比如保存不当或操作不当导致血清成分析出、混浊、污染等情况,可以优先更换同品牌、等级、批次的血清。如果是产品质量问题更换血清品牌的话,需要用一批细胞进行预实验才行,以保证细胞能够正常培养。另外大家在购买胎牛血清的时候要选择正规来源,非正规来源的胎牛血清有很多安全隐患,对实验室、操作人员、细胞培养、实验数据都有很大的影响。
05培养细胞时应使用多少浓度的二氧化碳?
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统,而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7 g时,细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时,则应使用5% CO2培养细胞。

06一般在拿到细胞后,应该注意什么?

收到细胞后先不要开盖,放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议对收细胞时的培养基拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,显微镜下拍细胞100X,200X各一张),排除细胞本身污染的情况;收到细胞未开封,出现污染状况一般可以再申请免费发送一株细胞。

收到细胞时如无异常情况,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,将培养瓶中培养液吸出,留下10ml培养液继续培养;超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。

细胞消化液建议使用PBS配制,慎用Hanks液配制。








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