ScienCell胎牛血清（0500）

货号：0500

规格：500ml

千舍生物开工大吉，干细胞专用，特级胎牛血清*......

1. 如何选用特殊细胞系培养基？

培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。

2. 何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。

3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基？

不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。

4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?

FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。

6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统，而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。

7.Hank's 蛋白酶(HBS)要在空气中使用，不需要CO2培养箱。原因是什么？Hank's 蛋白酶(HBS)和Earle's蛋白酶(EBS)有什么本质的功能差别？

HBS和 EBS 的主要差别在于氢钠的水平,在Eagles (2.2g/L)中比在Hanks (0.35g/L) 中高。氢钠需用高水平的CO2平衡，以维持溶液的PH值。Eagles液在空气水平的CO2 中，溶液会变碱，Hanks液在CO2培养箱中会变酸。如果希望在CO2培养箱中保存组织，需要用Eagles液，。如果仅仅是清洗将要在细胞培养基中储存的组织，用Hanks液就可以了。

8. 细胞之接种密度为何？

依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。

9. 悬浮性细胞应如何继代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中， 稀释细胞浓度即可，若培养液太多时， 可将培养角瓶口端稍微抬高， 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度， 重复前述步骤即可。

10.冷冻管应如何解冻？

取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。

11. 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

12. 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？

一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低，并可减少污染之机会。

13.欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

欲回收动物细胞， 其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡。

14. 细胞冷冻培养基之成份为何？

动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO 稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO 直接加入细胞液中， 必须使用前先行配制完成。

15.DMSO 之等级和无菌过滤之方式为何？

冷冻保存使用之DMSO 等级， 必须为Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即为无菌状况， 第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO 之裂解而释出有害物质， 并可减少污染之机会。若要过滤DMSO， 则须使用耐DMSO 之Nylon 材质滤膜。

16.冷冻保存细胞之方法？

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4 °C 30~60 分钟→ (-20 °C30 分钟*) → -80 °C 16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。

冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 °C 至–80 °C 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 °C 不可超过1 小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C 冰箱中，惟存活率稍微 降低一些。

17. 细胞欲冷冻保存时， 细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？

冷冻管内细胞数目一般为1x106 cells/ml vial， 融合瘤细胞则以5x106 cells/ml vial 为宜。

18.培养基中是否须添加抗生素？

除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。

19.应如何避免细胞污染？

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染好方法。

20.如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？

原则上：直接灭菌后丢弃之。

当重要的培养污染时，研究者可能试图消除或控制污染。首先，确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母，把污染细胞与其它细胞系隔离开，用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台，检查HEPA过滤器。

高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性，因而，做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如霉素b和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。

1.在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞，稀释到常规细胞传代的浓度。

2.分散细胞悬液到多孔培养板中，或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内，把选择抗生素加入到每一个孔中。例如，霉素b推荐下列浓度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。

3.每天观测细胞毒性指标，如脱落，出现空泡，汇合度下降和变圆。

4.确定抗生素毒性水平后，使用低于毒性浓度2～3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2～3代。

5.在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

6.重复步骤4。

7.在无抗生素的培养基中培养4～6代，确定污染是否以已被消除。

21.支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？

不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。

22.支原体污染会对细胞培养有何影响？

支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数， 代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。

23. 侦测出细胞株有支原体污染时， 该如何处理？

直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。

24. CO2 培养箱之水盘如何保持清洁？

定期(至少每两周一次) 以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。

25.为何培养基保存于4 °C 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？

培养基保存于4 °C 冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenol red) 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2， 以调整pH 值。

26. 各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？

不同厂牌的dish 或flask， 其所coating 的polymer 不同， 制造程序亦不同， 虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish 或flask 而有显著之生长差异。

27. 购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？

研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少， 大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤， 以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心， 应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。

28.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？

研究人员在细胞培养时出现存活率不佳， 常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80 °C 太久。

29. 收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？

冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

30.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

31.GlutaMAX-I是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-I？这个二肽有多稳定？

GlutaMAX-I 二肽是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的alpha-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。

GlutaMAX-I二肽非常稳定，即使在121磅灭菌20分钟，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解，如果在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎*降解。

32.什么培养基中可以省去加酚红？

酚红在培养基中用作PH值的指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。研究表明，酚红可以模拟固醇类激素的作用，（特别是雌激素）。为避免固醇类反应，培养细胞，尤其是哺乳类细胞时，用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测，一些研究人员在做流式细胞检测时，不使用加有酚红的培养基。

33.如何用台盼兰计数活细胞？

用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升细胞悬液中加0.1毫升0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色细胞是死细胞。

34.培养基中丙酮酸钠的作用是什么？

丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是，如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。

35.二价离子抑制蛋白酶活性吗？使用蛋白酶时加入EDTA的目的是什么？

二价离子的确抑制蛋白酶活性。EDTA用来螯合游离的镁离子和钙离子，以便保持抑制蛋白酶的活性。建议蛋白酶处理细胞前，用EDTA清洗细胞，以消除来自培养基中所有的二价离子。

06、培养基到底要不要加抗生素?

除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。如果是没有进行过细胞培养的新手，对无菌技术没有信心的，或者提取的原代细胞，怕污染的，可以适量添加抗生素。抗生素本身也是有毒性的，有些抗生素的药效浓度水平与毒效浓度水平非常接近，对细胞多少有伤害。

07、培养箱二氧化碳使用比例如何判定?

一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5CO2培养细胞。

08、L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?

L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

09、培养基里的粉红色是什么?

酚红一般作为培养基中pH值的指标：当培养基呈中性时为红色，呈酸性时为黄色，碱性时为紫色。另外，酚红可以模拟类固醇激素(特别是雌激素)的作用。如果要避免类固醇反应，可以在无酚红的培养基里进行培养。

10、胰酶里EDTA的作用?

二价的离子会抑制胰酶活性，所以加入EDTA可以螯合掉Ca、Mg这样的二价离子。胰酶也要注意不要反复冻融。

11、如何避免细胞培养过程中的污染?

主要还是考虑无菌环境，尽量做好操作台的灭菌，别把培养基滴落在生物安全柜的入风口，别在培养箱里把培养基打翻。这两个地方霉菌一旦滋生，那你就只能等着用甲醛熏蒸了。

紫外无法杀灭霉菌，酒精也不行，只能用甲醛熏蒸，但是一定要注意安全。复苏的时候，水浴锅也需要进行灭菌处理。一旦出现污染，不要急，能救的就用抗生素救一下，但是一般情况下，选择扔掉。避免交叉感染，要不只能整个实验室消毒了。

ScienCell胎牛血清（0500）

人 SV40  转染成骨细胞 HFOB1.19

人胃癌细胞 HGC-27

人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2

人肾上皮细胞 HKb-20

人早幼粒白血病细胞 HL 60（hl-60）

人肝细胞 HL-7702[L-02]

人小胶质细胞 HMC3

人高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM

人骨肉瘤细胞 HOS

人胰腺癌细胞 HPAC

人胎盘细胞（有限细胞系） Hs 815.Pl

人乳腺癌细胞 HS578T

人脑胶质瘤细胞 HS683

人真皮成纤维细胞（原代细胞永生化） HSF(SV40)

人纤维肉瘤细胞 HT-1080

人膀胱癌细胞 HT-1376

人结肠癌细胞 HT-29 (HT29)

人眼小梁网细胞 HTMC

人胰腺导管细胞 HPNE

人肝母细胞瘤细胞 HUH-6

人肝癌细胞 huh-7

人肝癌细胞 huh-7.5.1

人T淋巴细胞白血病细胞 HUT-78

人十二脂肠腺癌 HUTU-80

人脐静脉内皮细胞（原代细胞永生化） HUVEC

人脐静脉内皮细胞 HUV-EC-C

人脐静脉内皮细胞永生化+RFP HUVEC+RFP

人脐静脉内皮细胞永生化+GFP HUVEC+GFP

人诱导多能干细胞 iPS

人子宫内膜癌细胞 Ishikawa

人正常卵巢上皮细胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN）

人胚肺成纤维细胞 IMR-90

人急性T细胞白血病细胞 J.gamma1

人膀胱移行细胞癌 J82

人胎盘绒毛癌细胞 JAR

人胰腺癌细胞 JF-305

人绒毛膜癌细胞 JEG-3

人T淋巴细胞白血病细胞 Jurkat（clone E6-1）

人慢性骨髓性白血病细胞系 K562

人K562耐阿霉素细胞株 K562/ADR

人口腔表皮癌细胞 KB

人急性髓性白血病细胞 KG-1a

人卵巢颗粒细胞瘤细胞 KGN

人脑胶质细胞瘤细胞 KNS-89

人外周血嗜碱性白血病细胞 KU812

人食道癌细胞 kyse30

人肝癌细胞 Li-7

人胶质瘤细胞 LN229

人前列腺癌细胞 LNCaP clone FGC

人结直肠癌细胞 lovo

人结直肠癌细胞氟尿嘧啶耐药株 LOVO/5FU

人结直肠癌细胞荧光素酶标记 LOVO+LUC

人结直肠腺癌细胞 LS174T

人结直肠癌细胞 LS180

人结直肠癌细胞 LS513

人肝星形细胞 LX-2

人乳腺上皮细胞 MCF-10A

人乳腺癌细胞 MCF-7

人乳腺癌阿霉素耐药细胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌细胞荧光素酶标记 MCF-7+luc

人乳腺细胞 MDA-KB2

人乳腺癌细胞 MDA-MB-231

人乳腺癌X细胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌细胞荧光素酶标记 MDA-MB-231+LUC

人乳腺癌细胞 MDA-MB-361

人黑素瘤细胞 MDA-MB-435S

人乳腺癌细胞 MDA-MB-436

人乳腺癌细胞 MDA-MB-453

人乳腺癌细胞 MDA-MB-468

人子宫颈表皮癌细胞 ME-180

人膜间皮细胞 MET-5A

人骨肉瘤细胞 MG63

人胃癌细胞 MGC-803

人高转移性肝癌细胞 MHCC-97H

人高转移性肝癌细胞荧光素酶标记 MHCC-97H+luc

人高转移性肝癌细胞 MHCC-97L

人胰腺癌细胞 MIA-PACA-2

人胃癌细胞 MKN-45

人多发性骨髓瘤细胞 MM.1R

人多发性骨髓瘤细胞 MM.1S

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