产品名称：293A人胚肾细胞（传代）​   

细胞规格：1-3×10^6细胞量

库存状态：现货

培养液：DMEM+10% FBS

运输方式：常温顺丰运输和干冰顺丰运输

货 期：复苏细胞需要1-2周，冻存细胞的需要3-5天（特殊情况会有说明）

质 控：无支原体、无污染、符合标准

研究范围：仅供科研使用

293A人胚肾细胞（传代）​  

品 牌： NTC胎牛血清、Sigma 胎牛血清、PAA 胎牛血清

货 号：SFBE、F2442、A15-151

规 格： 500ml

温馨提示：本产品仅限于非临床科研用途。

运输保存及注意点：

1.干冰全程运输，保证您的使用！

2.-20℃，避光恒温冰箱，避免反复冻融！

  我司主营产品是国内传代细胞和细胞培养相关的生物试剂。GIBCO、HyClone、NTC、SIGMA、 BI 、GEMINI、PAN和SBI无外泌体血清等高品质血清。常规液体培养基、胰酶、双抗、无血清冻存液、日本三菱产品、ELISA 试剂盒、Sigma现货试剂等产品。售后完善，我们以饱满的热情欢迎新老客户选购！

    MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐药株、HCT8/5-fu 人回肠直肠腺癌细胞五氟尿嘧啶耐药株、LOVO/5-FU 人结肠癌细胞五氟尿嘧啶耐药株、HCT116/L人结肠癌奥沙利铂耐药细胞、HL60/ADR人早幼粒急性白血病细胞耐阿霉素株、PC9GR(PC9R)人肺癌细胞耐吉非替尼、LOVO/ADR人结肠癌细胞阿霉素耐药株、HNE1/DDP人鼻咽癌细胞顺铂耐药株、SGC7901/5-fu人胃癌细胞五氟尿嘧啶耐药株、A549/DDP人肺癌细胞顺铂耐药株、MCF-7/DDP人乳腺癌细胞顺铂耐药株、A549/ADR人肺癌细胞阿霉素耐药株、SGC7901/DDP人胃癌细胞顺铂耐药株、SKOV3/DDP人卵巢癌细胞顺铂耐药株、HELA/DDP人宫颈癌耐顺铂细胞株。

  3T3-L1 小鼠胚胎成纤维细胞、NIH/3T3小鼠胚胎细胞、Raw264.7小鼠单核巨噬白血病细胞、B16-F10小鼠黑色素瘤高转细胞、B16 小鼠黑色素瘤细胞、CT26.WT小鼠结肠癌细胞、SV40 MES 13小鼠肾小球系膜细胞、F9 小鼠畸胎瘤细胞、MLE-12 小鼠肺泡上皮细胞、Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤细胞、BV2 小鼠小胶质细胞、DC2.4小鼠树突状细胞、U14 小鼠子宫颈癌细胞、M-NFS-60小鼠骨髓性白血病细胞、mMSC小鼠骨髓间充质干细胞、HL-1小鼠心肌细胞、TM3 小鼠睾丸间质细胞、k7m2.wt小鼠骨肉瘤成骨细胞、mc3t3 e1小鼠胚胎成骨细胞前体细胞、hepa1-6 小鼠肝癌细胞、SP2/0小鼠骨髓瘤细胞、HT22小鼠海马神经元细胞系、MC38小鼠结肠癌细胞、mpc5小鼠足细胞、4T1 小鼠乳腺癌细胞、ANA-1小鼠巨噬细胞、TM4 小鼠睾丸支持细胞、STO 小鼠胚胎成纤维细胞、bend.3 小鼠脑微血管内皮细胞、J774A.1小鼠单核巨噬细胞、H9C2 大鼠心肌细胞、PC-12(低分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)、PC-12(高分化) 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)、AR42J 大鼠胰腺外分泌细胞、IEC-6 大鼠小肠引窝上皮细胞、RT4-D6P2T 大鼠神经鞘瘤细胞、INS-1 大鼠胰岛细胞瘤细胞、NRK-52E 大鼠肾小管导管上皮细胞、BHK-21 仓鼠肾成纤维细胞、

PK-15 猪肾细胞、Duckembyro 鸭胚胎成纤维细胞、vero 绿猴肾细胞、Hep3B人肝癌细胞、HPAC人胰腺癌细胞、HT-1376 人膀胱癌细胞、JAR 人胎盘绒毛癌细胞、KNS-89 人脑胶质细胞瘤细胞。

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培 养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。

操作步骤
（一）胰酶消化法
1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带 入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。
2、用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。
3、用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。
5、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。
6、静置5—10分钟，使未分散的组织块下沉，取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm，离心10分钟，弃上清液。
8、加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。
10、将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。 上述消化分离的方法是zui基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如 胶原酶，透明质酶等）。
Hyclone胎牛血清SH30084.03  、Hyclone胎牛血清SH30406.02  、Hyclone胎牛血清SH30406.05 、Hyclone胎牛血清SH30396.03  、Hyclone胎牛血清SH30070.03

特级胎牛血清 SH30070.03E 、Hyclone胎牛血清 SH30370.03  、活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03  、活性炭/葡聚糖处理胎牛血清，热灭活 SH30068.03HI 、

马血清SH30074.03  、乌拉圭胎牛血清SV30087. 03 、Hyclone胎牛血清SH30071.03 、Hyclone胎牛血清SV30160.03。

BOVOGEN胎牛血清 SFBS 、BOVOGEN新生牛血清 SNCS。

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101 、PAA 优等胎牛血清FBS A15-151。

BI优等胎牛血清 04-001-1ACS 、BI ES级别胎牛血清 04-002-1A 、BI 间充质胎牛血清 04-400-1A 。

Corning胎牛血清 35-076-CV。

PAN胎牛血清FBS P30-3302  、PAN胎牛血清FBS ST30-3302 、PAN ES级别胎牛血清 ST30-2602 、PAN胎牛血清Plus ST30-3302P ；

NTC优等胎牛血清 SFBE、TCB胎牛血清 101ZC。

Gemini优等胎牛血清 900-108 、Gemini特级胎牛血清 100-500  、Gemini科研用人AB血清100-512 。 

Sigma 特级胎牛血清F2442 、Sigma正常人AB血清 H4522 。

SBI 无外泌体血清 EXO-FBS-50A-1。

GIBCO胎牛血清盒装A31608-02、GIBCO马血清16050-122、GIBCO 胎牛血清10270-106、双抗15140-122、SV30010  、胰酶 25200-056、SH30042.01 、GIBCO 胰酶 25200-072。

（二）组织块直接培养法。自上方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃静置3—5小时，轻 轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。

双抗 15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

DMEM高糖培养基 C11995500BT

DMEM低糖培养基 C11885500BT

PBS C10010500BT

1640培养基 C11875500BT

DMEM/F12 C11330500BT

MEM培养基 C11095500BT

α-MEM C12571500BT

DMEM低糖 SH30021.01

DMEM高糖 SH30022.01、SH30243.01

DMEM/F-12 1:1 SH30023.01

MEM/EBSS SH30024.01

PBS缓冲液 SH30256.01

α-MEM SH30265.01

RPMI-1640 SH30809.01

DPBS SH30028.02

31232-250G C1184 76524-100MG 334065-50G R2625 650471-1L‍

203521-100G 75688 V900830-5G 262072-25G T7505 V900852-25G

379816-1G 193992 43820-10G C4151-5G T1503 D0550-100G

71643-250G B8026 52976-1MG-F 30435-500G C3389 P3803-100ml

I1406-250MG C3667 A7906 R3875-10MG B5887 82524-1KG‍

398853-5G C8356 T46108-100G 61197-250G H4272 P1609000

M7634-100G D8418 158534-10G V900271-500G D2629 383112-100G

63138-250G S5631 T2036-100MG M1880-500G C7698 14400-100MG

223506-25G A2058 A7085-100G 223506-500G P3932 K1512-500G

C7902-500G 219703 15972-5ML-F C5080-500G R7632 72609-100MG

21097-250G 12072 S3132-100MG 12022-1KG G3632 C2932-5MG

105937-5G S4641 R0901-100ML 459097-5G G9268 119660-25G

A6014-10G C9752 209465-25G B4554-25G T0303 R8004-5MG

258024-5G M4125 32417-500MG T3251-25G S5390 S8875-500G

B6149-25MG T2885 04269-1KG 11569-25MG C7902 206075-1G

71162-25G 230251 205796-2G N1376-25G A9434 E9508-100ML

G0639-5G-9 P1379 21479-1ML 381071-25G S5761 G25150-50G

B0750-500G M3516 17843-250G 73677-250MG S7795 A4106-25G

L2884-10MG C6905 65969-10MG L2884-5MG C6288 T9250-5G 

C2885-25G C0406 S9251-100g L8533-250MG S5761 P9380-5G

62613-250G P9155 13180-100ML 518018-10G L2880 A88182-100G

09830-500G A2427 21719-5ML-F 324817-250MG D5879 202185-25G

原代动物细胞培养：

1、实验材料要新鲜，从活体分离材料后要低温保存，并尽快进行细胞分离实验。

2、无菌操作。操作时用的培养液，可加平时细胞培养液5倍含量的青链霉素。

3、用酶法分离细胞时，注意酶液的浓度和控制消化时间。

贴块法分离细胞时，注意动作要轻柔，不要伤到细胞组织，组织块边缘尽量平整有利于细胞游离。

4、培养液的选择。不同的细胞有对培养液中营养的要求不同，根据所分离细胞的特性选择。

传代细胞培养：

1、无菌操作

2、控制消化时间

3、及时关注细胞生长状态

神经细胞的原代培养是尽 量 创造于各类神经细胞生长的体外环境，获得状态良好，纯度较高细胞的方法 。 脑部组织来源的各种神经细胞的培养具有相似的取材过程和部分通用的培养条件。

除动物消毒以外，其他步骤都在超净台内进行 。

1. 动物的消毒：根据培养细胞的类型和要求不同，常用胎鼠和新生鼠做神经细胞的培养。消毒方法分别如下 。

(1) 孕鼠操作 孕鼠经wu 巴 bi妥na麻醉后，以棉球蘸碘伏擦拭腹部毛皮消毒 。 擦拭从中心向外方向进行，可更换棉球 1- 2次，面积尽量大一些，包括整个腹部和外生殖器周围 。 用第 1 套解剖器械打开动物腹腔，换第 2 套器械分离子宫并置于含冷 D ­PBS 的 100mm 玻璃皿中，再换第 3 套器械在每只胎鼠的间隔处剪开子宫并剥离出胎鼠 。

(2) 仔鼠操作 仔鼠（新生 7d 以内）直接浸泡于冰的 75%酒精中， -20℃冰箱低温消毒 10min 左右，动物失去知觉即可开始取材 。

2. 皮层组织的分离：新生鼠使用眼科剪将动物断头，并用镊子剥除头部的皮肤 。在冰 D -PBS 液中沿颅骨人字缝从后向前剥离 。 一般左手持弯镊，在动物两眼处以适当力度固定；右手持直镊，完成剥除皮肤 、 骨骼以及分离组织等工作 。 在显微镜下利用精细器械分离皮层或海马时，沿皮层边缘以 45° 角小心划开，并逐步使之剥离，转移组织入盛有冰 D - PBS 液的 35mm 小皿中；然后用精细器械仔细去除每个皮层或海马的脑膜（整个过程需要在低温冰袋上完成） 。

3.组织的分散；用管口较粗的弯头滴管吸去带有脑膜的 D - PBS, 尽zui去除干净液体并避免吸走组织；用虹膜剪将组织逐撮均匀剪成乳糜状，使组织块为 lmm3 的大小为宜 。 加入合适体积的消化液（－般盖过组织块并且可以随意摇晃即可），并均匀分散组织，放入37°C 孵育箱中消化约 15min (每间隔 3 -5min 用手轻轻摇晃1次，动物胎龄越小，越容易分散，消化时间可相应缩短） 。

4. 单细胞悬液的制备!用口径较粗的弯头滴管将消化好的组织吸入含 3 - 5ml 冰的*培养基的 10ml 离心管中，静置 5min 左右 。 用同样的滴管将沉底的组织转移到另 一个含约 5ml 冰的*培养基的 10ml 离心管中，并开始吹打 。 吹打时每次不超过 15 次，先用粗口径的弯头滴管吹散，静置片刻后将上清用细口径弯头滴管转移至另 一个离心管中，并再吹打 15 次左右 。 在原先含沉淀的离心管中再加入*培养基继续吹打，并收集上清重复上述过程 。 反复吹打几次后，组织块基本消失，将全部上清过 200 目筛网以去除剩余组织块并收集、计数 。 离心 (900r/min, 5min) 去除细胞碎片并将细胞重悬至合适的体积，以备后用 。

1.在做原代之前准备工作一定要做好，提前配好液体。整个操作过程注意无菌，且培养液中如无特殊说明，均含有青－链霉素（双抗）。

2.动物消毒应在远离超净工作台的区域完成，成年动物尤其要注意。

3.组织取材过程全部在低温环境中进行，可大大提高细胞存活；而且整个过程不宜太久，否则细胞活性明显降低。

4.在组织分散过程中，一般3只左右动物来源的皮层在一个小皿中剪碎消化，不宜在同一个小皿中处理过多的组织。

5.吹打细胞用的弯头滴管一定要事先经火焰抛光，否则细胞极易受伤而死亡；而且吹打细胞悬液时尽量避免产生过多气泡，可以提高细胞的存活。

6.基本上原代培养的各种神经细胞都需要生长在经特殊物质处理过的培养介质上，比如多聚赖氨酸、层黏连蛋白等。

1.大鼠和小鼠来源的神经细胞培养方法大致上相同，除特殊提到以外，基本可以通用。

2.去除脑膜时，一般左手持慑轻柔固定组织，右手负责剥离。整块脑膜一同被剥离后，往往细胞培养物中的成纤维细胞污染较少。

3.胰酶消化液处理后的组织往往发黏，这是细胞释放出DNA的原因。这并不会影响消化效果，而且可以在后面的吹打过程中去除。对于初学者，可以通过在消化液中加入DNA酶的方法提高zui终细胞的产量。

4.在胰酶消化液中加入EDTA有利于组织细胞团分散成单细胞，终止EDTA的作用主要依靠稀释以降低其浓度。

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