正常人结肠上皮细胞FHC培养说明书

正常人结肠上皮细胞FHC培养说明书

货号：WS256

规格：1×10⁶ 细胞/T25 培养瓶

一、细胞基本信息

- 细胞来源：胎儿结肠

- 细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

-传代比例/细胞消化：1:2传代，消化1-2分钟  

- 倍增时间： 10-15天

- 细胞含量：＞1×10⁶ 细胞/瓶

- 包装规格：T25 培养瓶 / 1mL 冻存管

- 产品用途：仅供科研使用，不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。

二、培养基与培养条件

1. 培养基

he base medium for this cell line is DMEM:F12 Medium (ATCC 30-2006).To make the complete growth medium， add the following components to the base medium:extra 10 mM HEPES (for a final conc. of 25 mM)10 ng/ml cholera toxin0.005 mg/ml insulin0.005 mg/ml transferrin100 ng/ml hydrocortisone20 ng/mL human recombinant EGF (Thermo Fisher PHG0311)Fetal Bovine Serum， 10% final conc (ATCC 30-2020)

推荐血清：WinSera FBS500 - WP - 002

2. 培养条件

- 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

3. 冻存与储存

- 冻存液：90%胎牛血清 + 10%DMSO（现配现用）

- 储存条件：液氮长期保存

三、运输形式与接收处理

1. 常温发货（T25 瓶活细胞）

收到细胞后，先对 T25 培养瓶瓶身进行表面消毒；将培养瓶放入培养箱静置 2 - 3 小时；观察细胞密度与生长状态，拍摄 2 - 3 张清晰照片反馈给销售；细胞密度达标即可进行传代，前期传代比例建议为 1:2；待细胞再次长满后，将其中一整瓶细胞冻存为 1 支 1mL 冻存管，另一瓶继续传代；建议反复冻存 2 - 3 支种子细胞后，再进行扩增实验，避免因突发情况导致细胞断种。

备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用于培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的培养基来培养细胞。收到细胞后次传代建议 T25 培养瓶按 1:2 传代。

2. 干冰发货（冻存管细胞）

常规发货为 2 支冻存管，建议复苏 1 支、留存 1 支备用；若支复苏失败，严格按照厂家标准复苏流程操作第二支；若两支均复苏失败，请立即留存复苏全过程照片，并时间通知销售处理。

四、细胞培养步骤

1.冻存细胞复苏

- 将 1mL 细胞悬液冻存管置于 37℃水浴，快速摇晃至解冻；

- 加入含 4 - 6mL 培养基的离心管中轻柔混匀；

- 1000RPM 离心 3 - 5 分钟，弃去上清液；

- 用培养基重悬细胞，接种至含 6 - 8mL 培养基的培养瓶/皿；

- 37℃培养过夜，次日在显微镜下观察细胞生长状态与密度。

2.对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：（细胞密度 80% - 90% 可传代）

- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1 - 2 次。

- 加入 0.25％（w/v）胰蛋白酶 - 0.53 mM EDTA 于培养瓶中（T25 瓶 1 - 2mL，T75 瓶 2 - 3mL），置于 37℃培养箱中消化 1 - 2 分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入 3 - 4ml 含 10%FBS 的培养基来终止消化。

- 轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 3 - 5min，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀。将细胞悬液按 1:2 的比例分到新 T25 瓶中，添加 6 - 8ml 按照说明书要求配置的新的培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按 1:2 - 1:5 的比例进行。

3.对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

- 注：次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自行决定。

- 方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1 - 2mL 培养液后吹匀，将细胞悬液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

- 方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

4.细胞冻存：收到细胞后建议在培养前 3 代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

五、生物安全注意事项

1. 所有动物细胞均视为具有潜在生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，做好个人防护；所有废液及接触过细胞的器皿，需经灭菌处理后方可丢弃。

2. 复苏冻存细胞时，务必佩戴防护手套、防护服及防护面罩；冻存管浸没在液氮中可能发生泄漏并灌入液氮，解冻时液氮气化易导致容器爆裂、瓶盖崩飞造成人员划伤等伤害，操作时务必谨慎。

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