MET-5A 人膜间皮细胞培养手册

MET-5A 人膜间皮细胞培养手册

货号：WS0397H

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶

细胞特性

1） 来源：间皮

2） 形态：上皮细胞样，贴壁生长

3） 含量：>1x10^6  细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

细胞处理：

冻存细胞的复苏：：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mLwan全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，wan全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mlwan全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的wan全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

一、细胞培养的原理

细胞培养（cell culture）是指在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。

细胞培养可分为原代培养和传代培养；直接从体内获取的组织细胞进行shou次培养为原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要传代培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器（同样底面积的容器）中扩大培养，传代培养的累积次数就是细胞的代数，肿瘤细胞系一般不超过50代。因此需要在每一次传代后，标记清楚（如P10，代表传代了10次）。

二、所需试剂和耗材

1、所需试剂

（1）wan全培养基：一般是用DMEM+10% FBS（胎牛血清，有时也添加双/三抗预防细胞感染。具体培养基类型根据细胞类型选择。培养基有不同类型，除了DMEM，还有1640等培养基，根据自己的细胞使用响应的培养基。可以在ATCC查看。

（2）0.25 %胰蛋白酶：简称是胰酶，消化细胞。一般消化1-2 min，时间太短，细胞消化不wan全，时间太长，会消化过度损伤细胞。

（3）冻存液：一般用 10% DMSO+FBS+培养基组成，FBS 和培养基的比例依细胞类型决定，比较珍贵的细胞一般用 90% FBS + DMSO，一般的细胞可以用50% FBS+40% 培养基来配制。现配现用。

（4）常用试剂：75% 酒精，PBS缓冲液等。

2、耗材

（1）细胞培养容器：培养瓶 25、50、250ml 等，培养皿：10cm、6cm，孔板：6孔板、12孔板、24孔板、96孔板等。具体根据情况进行选择对应的容量

（2）吸管、移液管、冻存管、各种枪和枪头、离心管、封口膜等。

三、实验仪器

离心机、生物安全柜、二氧化碳细胞培养箱、显微镜、液氮罐等

MET-5A 人膜间皮细胞

大鼠主动脉平滑肌细胞 A7R5

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化) PC-12(低分化)

大鼠β胰岛素瘤细胞 RIN-M5F

大鼠脊髓前角运动神经元瘤细胞 VSC4.1

大鼠骨肉瘤细胞 UMR-106

大鼠脑I型星形胶质细胞 CTX-TNA2

大鼠垂体瘤细胞 MMQ

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(未分化) PC-12(未分化)

大鼠嗜碱性细胞白血病细胞 RBL-2H3

大鼠少突胶质前体细胞系 OLN-93

大鼠垂体瘤细胞 GH3

大鼠骨骼肌成肌细胞 L6

正常大鼠肾细胞 NRK-49F

大鼠皮肤成纤维样细胞 RS1

大鼠肺泡Ⅱ型细胞 RLE-6TN

大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞 AR42J

大鼠小肠隐窝上皮细胞 IEC-6

大鼠神经胶质瘤细胞 C6

大鼠胚胎心肌细胞 H9c2(2-1)

大鼠背根神经节细胞 DRG

大鼠肝癌细胞 H4-II-E-C3

大鼠正常肝细胞 BRL3A

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化) PC-12(高分化)

大鼠空肠胶质细胞 EGCCRL-2690

大鼠雪旺细胞 RSC96

大鼠肾小球系膜细胞 HBZY-1

大鼠胶质肉瘤细胞 9L/lacZ

大鼠胰岛细胞瘤细胞 INS-1

大鼠肝上皮样干细胞 WB-F344

正常大鼠肾细胞 NRK-52E

大鼠小胶质细胞 HAPI

小鼠乳腺癌细胞 AT-3

小鼠肺上皮细胞 TC-1

小鼠鳞状细胞癌细胞 SCC7

小鼠垂体瘤细胞 AtT-20

小鼠淋巴结上皮细胞 SVEC4-10

小鼠胚胎纤维细胞 STO

小鼠睾丸间质细胞 TM3

小鼠急性骨髓性白血病 C1498

小鼠主动脉血管平滑肌细胞 MOVAS

小鼠黑色素瘤细胞 B16

小鼠乳腺癌细胞 E0771

小鼠树突状瘤细胞 DC2.4

小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 RAW264.7

小鼠成纤维细胞 NCTCclone929

小鼠脑微血管内皮细胞株 bend.3

小鼠胚胎成纤维细胞 C3H/10T1/2

小鼠心肌细胞　 HL-1

小鼠脑神经瘤细胞 Neuro-2a

小鼠胚胎成纤维细胞 MEF

小鼠肾小管上皮细胞 TCMK-1

小鼠单核巨噬细胞 J774A.1

小鼠胚胎肌母 C2C12

小鼠前脂肪胚胎成纤维细胞 3T3-L1

小鼠肺泡上皮细胞 MLE-12

小鼠乳腺上皮细胞 HC11

小鼠视网膜神经节细胞株 RGC-5

小鼠结肠癌细胞株 MC-38

小鼠淋巴瘤细胞(NK靶细胞) YAC-1

小鼠T淋巴瘤细胞（鸡OVA基因修饰） E.G7-OVA

小鼠正常肝细胞 NCTC1469

小鼠肺泡巨噬细胞 MH-S

小鼠肺腺癌细胞 LA7120

小鼠肾小球足细胞 mpc-5

小鼠T淋巴细胞 CTLL-2

小鼠主动脉内皮细胞 MAEC

正常小鼠睾丸Sertoli细胞 TM4

小鼠淋巴细胞白血病 L1210

小鼠腹水瘤细胞 S-180

小鼠杂交瘤（抗CD2）细胞 OKT11

小鼠小脑细胞 C8-D1A

小鼠睾丸间质细胞瘤细胞 MLTC-1

小鼠下丘脑神经元细胞 GT1-7

小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10

小鼠结肠癌细胞 CT26.WT

小鼠皮下结缔组织细胞 L Wnt-3A

小鼠血管内皮瘤细胞 EOMA

小鼠神经干细胞 NE-4C

小鼠胰岛β细胞株 Min6

小鼠B细胞淋巴瘤 A20

小鼠肝癌细胞 Hepa1-6

小鼠小胶质细胞 Bv-2

小鼠乳腺癌细胞 4T1

小鼠胚胎瘤细胞 ATDC5

小鼠胰腺癌细胞 PANC02

小鼠胶质瘤细胞 GL261

小鼠肺癌细胞 LLC

小鼠骨肉瘤成骨细胞 K7M2wt

小鼠乳腺癌细胞 EMT6

小鼠海马神经元细胞 HT22

小鼠小肠内分泌细胞系 STC-1

小鼠乳腺上皮细胞 EpH4-Ev