人脑神经母细胞瘤细胞SK-N-AS说明书
一、产品概述
种属 | 人 |
别称 | SKN-AS; SKNAS |
组织来源 | 脑,来源于转移部位:骨髓 |
疾病 | 神经母细胞瘤 |
传代比例/细胞消化 | 1:2传代,消化2-3分钟 |
wan全培养基配置 | DMEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗 |
简介 | 来自低分化胚胎神经母细胞瘤儿童的骨髓转移 |
形态 | 上皮细胞样 |
生长特征 | 贴壁生长 |
倍增时间 | 每周 2 至 3 次 |
STR | Amelogenin: X CSF1PO: 10,12 D13S317: 9 D16S539: 14 D5S818: 11,12 D7S820: 11,13 TH01: 9.3 TPOX: 11,12 vWA: 16,17 |
培养条件 | 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。 |
冻存条件 | 冻存液:90%FBS,DMSO 10%, 或使用非程序冻存液:货号JY-H040 |
保藏机构 | ATCC; CRL-2137 |
产品使用 | 仅限于科学研究,不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。 |
二、 贴壁细胞接收注意事项
贴壁细胞经过快递运输颠簸会出现漂浮脱落等情况: 收到先放培养箱静置稳定。如有脱落需收集处理,处理细节请查阅以下信息,原瓶内为运输培养液,血清含量只有5%,需及时更换专用wan全培养基。 收到细胞后请把细胞图片状态发此群里面, 根据图片可以给出接下来的处理建议(传代或者换液),一次建议一比二传代至2个T25。 贴壁细胞传代步骤: 准备工作:胰酶和wan全培养基(需要提前37度复温)、PBS(常温)避免细胞遇冷受刺激
(1) 吸出原培养液
(2) 加入2ml左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃
(3) 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶,轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。
(4) 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间,消化约2-3min,显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大,显微镜下看细胞呈单个游离状态,侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化,可以轻拍培养瓶侧身。(消化时主要看消化状态,如果没有变圆,侧立时不能滑落时,可以适当延长消化时间,每30s观察一次细胞)
(5) 加入3ml含10%血清的培养基终止消化,轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打(不要太用力)使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。
(6) 收集细胞悬液离心,1000rpm/min(约250g) 5分钟,离心完吸出上清丢弃。
(7) 加入新鲜wan全培养基,吹打几下混匀细胞即可,按需接种到新培养瓶,补wan全培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。
(8) 检查培养箱二氧化碳,温度和水盘。
这个是贴壁细胞传代的方法,特别注意的是第4步消化过程,消化至到细胞wan全变圆以后侧立培养瓶细胞可以出现滑落时再终止消化。
消化成游离状态,后续轻轻稍微吹一下即可很好的分散细胞
后续处理建议:传代后2-3天换液一次即可,(如细胞第二天全部贴壁培养基颜色变黄,可以换液,)无需每天换液(换液太勤可能会损失细胞影响细胞状态)换液时候如果没有特殊情况也可以不用PBS清洗
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