贴壁细胞接收注意

贴壁细胞接收注意事项

贴壁细胞经过快递运输颠簸会出现漂浮脱落等情况： 收到先放培养箱静置稳定。如有脱落需收集处理，处理细节请查阅以下信息，原瓶内为运输培养液，血清含量只有5%，需及时更换专用wan全培养基。

收到细胞后请把细胞图片状态发到群， 根据图片可以给出接下来的处理建议（传代或者换液），建议一比二传代至2个T25。 

贴壁细胞传代步骤： 准备工作：胰酶和wan全培养基（需要提前37度复温）、PBS（常温）避免细胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培养液

（2） 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。贴壁细胞传代步骤： 准备工作：胰酶和wan全培养基（需要提前37度复温）、PBS（常温）避免细胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培养液

（2） 加入2ml左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，吸出PBS丢弃

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞。

（4） 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间，消化约2-3min，显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大，显微镜下看细胞呈单个游离状态，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，可以轻拍培养瓶侧身。（消化时主要看消化状态，如果没有变圆，侧立时不能滑落时，可以适当延长消化时间，每30s观察一次细胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打（不要太用力）使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。

（6） 收集细胞悬液离心，1000rpm/min（约250g） 5分钟，离心完吸出上清丢弃。

（7） 加入新鲜wan全培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足wan全培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

（8） 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

这个是贴壁细胞传代的方法，特别注意的是第4步消化过程，消化至到细胞wan全变圆以后侧立培养瓶细胞可以出现滑落时再终止消化。

消化到这样的成游离状态，后续轻轻稍微吹一下即可很好的分散细胞

后续处理建议：传代后2-3天换液一次即可，（如细胞第二天全部贴壁培养基颜色变黄，可以换液，）无需每天换液（换液太勤可能会损失细胞影响细胞状态）换液时候如果没有特殊情况也可以不用PBS清洗

（4） 根据不同的细胞放入培养箱时及时关注消化时间，消化约2-3min，显微镜下看到细胞中间的细胞明显分离变圆细胞间隙变大，显微镜下看细胞呈单个游离状态，侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化，可以轻拍培养瓶侧身。（消化时主要看消化状态，如果没有变圆，侧立时不能滑落时，可以适当延长消化时间，每30s观察一次细胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使之脱壁并在液体里反复轻轻吹打（不要太用力）使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液。

（6） 收集细胞悬液离心，1000rpm/min（约250g） 5分钟，离心完吸出上清丢弃。

（7） 加入新鲜wan全培养基，吹打几下混匀细胞即可，按需接种到新培养瓶，补足wan全培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

（8） 检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。

这个是贴壁细胞传代的方法，特别注意的是第4步消化过程，消化至到细胞wan全变圆以后侧立培养瓶细胞可以出现滑落时再终止消化。

消化到这样的成游离状态，后续轻轻稍微吹一下即可很好的分散细胞

后续处理建议：传代后2-3天换液一次即可，（如细胞第二天全部贴壁培养基颜色变黄，可以换液，）无需每天换液（换液太勤可能会损失细胞影响细胞状态）换液时候如果没有特殊情况也可以不用PBS清洗 。