人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株HCT-15+5FU

更新时间：2025-02-18

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人结直肠癌氟尿嘧啶耐药株HCT-15+5FU

细胞介绍

HCT-15/FU为由HCT-15细胞构建的耐5-FU药物细胞株。

细胞特性

1）来源：人结肠癌细胞耐药筛选

2）形态：上皮细胞样，贴壁生长

3）含量：>1×10^6 细胞数

4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）用途：仅供科研使用。

6）培养条件：RPMI1640培养基；10%胎牛血清；1%双抗

细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mLwan全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，wan全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8mlwan全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的wan全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

下面T25瓶为例；

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

细胞培养的过程中发现有黑点怎么办？

首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混油。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果在镜下现察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关:

(1)细胞生长过老，破碎的细胞残骸:

(2)配制培养基的pH值偏高，不直细胞生长;

(3)培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除;

(4)血清等级不足以维持细胞良好的生长，更换高等级的胎牛血清。