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LNCAP细胞培养小技巧
发布时间:2022-09-22 点击量:341

LNCAP细胞培养小技巧


简介:

细胞名称:人前列腺癌细胞LNCaP clone FGC

培养条件:1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠+1%P/S

生长状态:贴壁生长

LNcapcloneFGC,人前列腺癌细胞,1977年从一名患有前列腺癌的50岁男性的左锁骨上淋巴结转移中建立,该患者经确诊为前列腺癌转移;文献中描述细胞对雄激素敏感。

该细胞培养期间会遇到那些问题或者特殊需求呢?

1、生长速度缓慢。

2、培养一段时间发现聚团了怎么办?

3、使用的培养瓶是否需要特殊处理或者采用一些特殊的培养瓶呢?

想必这些是大家经常遇到的问题吧,那么下面我们就为大家一一解答这些疑问,处理大家经常遇到的问题吧。

该细胞自身生长速度是属于比较缓慢的一种类型,具体倍增时间大约在60多个小时左右,这些是我们实验人员难以干预的因素,另外该细胞在培养的时候会引起培养基ph值明显变化,因此及时更换培养液是必须做的选择之一。我们能做到的是处理该细胞的时候,注意提高相应的冻存量(比如2个长满的T25培养瓶冻存3株作为备用),此外冻存液也要稍微多300ul左右,提高存活率。另一点,根据该细胞的培养条件入手了,该细胞经常使用的培养条件是:RPMI-1640(品牌:中乔新舟 货号:ZQ-200)+10%FBS(品牌:中乔新舟 货号: AU0600)+1%PS(货号:CSP006)+1%L-alanyl-L-glutamine(品牌:中乔新舟  货号:CSP004)+%SP(品牌:中乔新舟  货号:CSP003),推荐*培养基(品牌:中乔新舟 货号:ZQ-221)我们实验室长期的培养发现,该细胞在20%的血清浓度下,生长速度相比较10%有所提升,且此方法也被一些大厂培养机构所使用,对实验时间有要求的小伙伴来说是比较好的一个方法。


如图一所示可以看出细胞出现明显聚团严重的现象,遇到这样情况我们该如何培养出图二这么好看的细胞呢?

我们建议针对消化处理和培养器皿的选择两方面来优化,接下来分享一下我们实验室的一些小技巧,帮助大家更好的处理这个细胞。首先这株细胞并不形成一致的单层,而是形成集落,这也是此细胞为何总是出现这个现象的一个原因,因此我们才会想到从细胞消化及培养器皿的处理、选择上去解决这个问题。

在消化处理的时候,我们选用的胰酶浓度是0.25%,弃去上清培养液后,在瓶内添加1ml左右0.25%的胰酶,让它覆盖T25瓶底,迅速吸出丢弃,然后再添加1ml的胰酶,放入到培养箱中消化,此时每2min拿出细胞镜下观察,轻轻拍打瓶底如果多数细胞呈流沙状,然后添加终止液,用巴氏管在瓶底轻轻吹打细胞悬液,目的是把细胞吹散,不要出现团块即可进行下一步的传代或者冻存等操作。

关于器皿的选择,我们实验室前期使用的是Corning的Cellbind培养瓶培养,但后面经过长期的对比培养发现采用我公多聚赖氨酸包被液(货号:0413)包被过的T25培养瓶培养的细胞,形态及状态更佳,更不容易出现细胞聚团的现象。

以上就是lncap细胞培养的一些小技巧,大家get到了吗?

细胞复苏注意事项

1、整个复苏过程要尽量快,溶解时间太长可能影响复苏效果;

2、已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放,尽快稀释或者离心去除DMSO;

3、由于“化冰"这一步里冻存管与水温差太大,尤其是液氮里拿出来的冻存管,放到水里可能会造成翻江倒海的既视感,所以可以用镊子夹住冻存管往水里摁,这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲;

4、取冻存管时要谨防冻伤,尤其是夏天,尽管热也最好穿长袖白大褂;

5、离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行,也就是直接把冻存管离心,离心后弃去原来的冻存液,然后直接加*培养基重悬细胞,接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净,但是基本影响不大;

6、复苏第二天记得去看看细胞,如果状态还不错的话就说明复苏成功。 


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