LNCAP细胞培养小技巧

简介:

细胞名称：人前列腺癌细胞LNCaP clone FGC

培养条件：1640+10%FBS+1% L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠+1%P/S

生长状态：贴壁生长

LNcapcloneFGC，人前列腺癌细胞，1977年从一名患有前列腺癌的50岁男性的左锁骨上淋巴结转移中建立，该患者经确诊为前列腺癌转移；文献中描述细胞对雄激素敏感。

该细胞培养期间会遇到那些问题或者特殊需求呢？

1、生长速度缓慢。

2、培养一段时间发现聚团了怎么办？

3、使用的培养瓶是否需要特殊处理或者采用一些特殊的培养瓶呢？

想必这些是大家经常遇到的问题吧，那么下面我们就为大家一一解答这些疑问，处理大家经常遇到的问题吧。

该细胞自身生长速度是属于比较缓慢的一种类型，具体倍增时间大约在60多个小时左右，这些是我们实验人员难以干预的因素，另外该细胞在培养的时候会引起培养基ph值明显变化，因此及时更换培养液是必须做的选择之一。我们能做到的是处理该细胞的时候，注意提高相应的冻存量（比如2个长满的T25培养瓶冻存3株作为备用），此外冻存液也要稍微多300ul左右，提高存活率。另一点，根据该细胞的培养条件入手了，该细胞经常使用的培养条件是：RPMI-1640（品牌：中乔新舟 货号：ZQ-200）+10%FBS（品牌：中乔新舟 货号: AU0600）+1%PS（货号：CSP006）+1%L-alanyl-L-glutamine（品牌：中乔新舟  货号：CSP004）+%SP（品牌：中乔新舟  货号：CSP003），推荐*培养基（品牌：中乔新舟 货号:ZQ-221）我们实验室长期的培养发现，该细胞在20%的血清浓度下，生长速度相比较10%有所提升，且此方法也被一些大厂培养机构所使用，对实验时间有要求的小伙伴来说是比较好的一个方法。

如图一所示可以看出细胞出现明显聚团严重的现象，遇到这样情况我们该如何培养出图二这么好看的细胞呢？

我们建议针对消化处理和培养器皿的选择两方面来优化，接下来分享一下我们实验室的一些小技巧，帮助大家更好的处理这个细胞。首先这株细胞并不形成一致的单层，而是形成集落，这也是此细胞为何总是出现这个现象的一个原因，因此我们才会想到从细胞消化及培养器皿的处理、选择上去解决这个问题。

在消化处理的时候，我们选用的胰酶浓度是0.25%，弃去上清培养液后，在瓶内添加1ml左右0.25%的胰酶，让它覆盖T25瓶底，迅速吸出丢弃，然后再添加1ml的胰酶，放入到培养箱中消化，此时每2min拿出细胞镜下观察，轻轻拍打瓶底如果多数细胞呈流沙状，然后添加终止液，用巴氏管在瓶底轻轻吹打细胞悬液，目的是把细胞吹散，不要出现团块即可进行下一步的传代或者冻存等操作。

关于器皿的选择，我们实验室前期使用的是Corning的Cellbind培养瓶培养，但后面经过长期的对比培养发现采用我公多聚赖氨酸包被液（货号：0413）包被过的T25培养瓶培养的细胞，形态及状态更佳，更不容易出现细胞聚团的现象。

以上就是lncap细胞培养的一些小技巧，大家get到了吗？

细胞复苏注意事项

1、整个复苏过程要尽量快，溶解时间太长可能影响复苏效果；

2、已溶解的冻存细胞尽量短时间的在常温存放，尽快稀释或者离心去除DMSO；

3、由于“化冰"这一步里冻存管与水温差太大，尤其是液氮里拿出来的冻存管，放到水里可能会造成翻江倒海的既视感，所以可以用镊子夹住冻存管往水里摁，这样即使有炸裂的情况也会有水做缓冲；

4、取冻存管时要谨防冻伤，尤其是夏天，尽管热也最好穿长袖白大褂；

5、离心这一步也可以在冻存管里的冰融化后直接进行，也就是直接把冻存管离心，离心后弃去原来的冻存液，然后直接加*培养基重悬细胞，接着把细胞转到培养皿/瓶里培养。这种方法也许不能将DMSO清除得很干净，但是基本影响不大；

6、复苏第二天记得去看看细胞，如果状态还不错的话就说明复苏成功。