怎么做好微生物污染的预防？

微生物污染在细胞培养中是非常常见的，也是令人头大的一件事情。所以我们一定要将问题扼杀于摇篮之中，规范实验中的各个步骤，确保细胞“宝宝"在无污染的情况下健康成长。

1．实验进行前，准备好所需的试剂和器材。玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒：1)高压蒸汽灭菌15分钟以上；2)干烤消毒140℃2小时以上。

2．培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验：将血清按10%加入培养基内，用无菌的玻璃离心管或玻璃瓶取*培养基5-10ml置培养箱内培养2-3天，肉眼见无浑浊或沉淀等异物。分装后置4℃保存。

3．消化液(pH7.8)或其它加入液，应用高压蒸汽灭菌或一次性无菌滤器过滤除菌，分装成支置-20℃保存。

4．超净台用紫外灯照射30-60min，并开启超净台风机运转5-10min，然后用75%酒精擦拭超净台台面，再开始实验操作。

5．实验进行时，佩戴好口罩及手套，穿上洁净实验服，有长发则将长发扎起或者佩戴帽子，避免灰尘或唾液进入培养物中。

6．进入超净台前应用75%酒精对双手及手腕进行全面擦拭，确保除菌*。

7．实验用品用75%酒精擦拭后才能放入超净台内。

8．操作时小心取用无菌物品，应避免污染。勿碰触吸管尖头，不小心碰触后应立即更换；手及物品不要在暴露的瓶口上方来往，容器打开后，倾斜45度操作，操作完成后及时盖上瓶盖。

9．每次操作只处理一种细胞；即使不同细胞使用相同的培养基也不要共享同一瓶培养基，避免细胞间的交叉污染。

10．实验用品用完应移出超净台，以利于空气流通；实验完成后用75%酒精擦拭超净台台面。

11．定期清洗或更换超净台过滤膜、预滤网。

12．此外CO2培养箱的清洁是较易被忽视的地方，应1-2个月对培养箱定期进行清洁消毒。先用75%酒精擦拭培养箱内壁、隔板、水盘2-3次，用双蒸水清洗，再用酒精棉球擦拭一遍，最后紫外灯照射1h以上或进行高温高压灭菌处理。水盘内加入无菌水（应每周更换），待培养箱内温度、湿度、CO2浓度稳定后再放入细胞。

人膀胱癌细胞 5637

人膀胱癌细胞 BIU-87

人膀胱癌细胞 BT-B

人膀胱癌细胞 ECV-304

人膀胱癌细胞 EJ-1[EJ1]

人膀胱癌细胞 HT-1376

人膀胱移行细胞癌 J82

人膀胱移行细胞乳头瘤 RT4

人膀胱鳞癌细胞 SCaBER

人膀胱上皮永生化细胞 sv-huc-1

人膀胱移行细胞癌 SW780

人膀胱移行细胞癌细胞 T24

人膀胱移行细胞癌 UM-UC-3

小鼠膀胱癌细胞 MB49

人胚肾细胞 293T

人肾细胞腺癌细胞 769-P

人肾透明细胞腺癌细胞 786-O[786-0]

人肾癌细胞 A498

人肾细胞腺癌细胞 ACHN

人肾透明细胞癌皮肤转移细胞 caki-1

人肾透明细胞癌 CAKI-2

人胚肾细胞 HEK-293（293）

人胚肾细胞 HEK-293A

人肾皮质近曲小管上皮细胞 HK-2

人肾上皮细胞 HKb-20

人肾上腺皮质细腺癌细胞 NCI-H295R

人肾癌细胞 OS-RC-2

人胚肾细胞 ProPakA.6

人肾母细胞瘤细胞 SK-NEP-1

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW-13

人肾上腺皮质小细胞癌细胞 SW1353

小鼠肾足细胞 MPC-5

小鼠肾癌细胞 Renca

小鼠肾小球系膜细胞 SV40-MES-13

正常大鼠肾细胞 NRK-49F

大鼠肾细胞 NRK-52E

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 低分化 PC12低分化

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 高分化 PC12高分化

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 未分化 PC12未分化

仓鼠肾成纤维细胞 BHK-21(C-13)

猪肾细胞系 PK-13

猪肾细胞 PK-15

非洲绿猴肾细胞 SV40转化 COS-7

恒河猴肾细胞 MA-104

非洲绿猴胚胎肾细胞 Marc145

非洲绿猴肾细胞 VERO

非洲绿猴肾细胞 VERO E6

非洲绿猴SV40转化的肾细胞 COS-1

狗肾恶性组织细胞增生症细胞 DH-82

猫肾细胞 F81

牛肾细胞 MDBK

狗肾转化细胞 MDCK

小鼠肾小球系膜细胞永生化

鸡肾小管上皮细胞永生化