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无外泌体血清该如何制备?
更新时间:2022-08-30 点击量:2669
  外泌体是指含有复杂RNA和蛋白质的小膜囊泡(30-150nm)。如今,它们特指直径为40-100nm的盘状囊泡。作为细胞间通讯的重要媒介,它作为信使,为细胞和细胞外环境传递信息,保证机体的正常工作。对于大多数细胞而言,用于体外培养的标准培养基必须在基础培养基的基础上添加胎牛血清(FBS)作为生长添加剂。然而,常用的FBS通常来自牛血清,其中含有大量的牛外泌体和外源性细胞外囊泡。这些外泌体含有牛相关蛋白或miRNA和其他分子。在研究相关细胞自身分泌的外泌体时,牛血清中的外泌体可能会造成严重的背景问题,从而影响或干扰结果的判断。在细胞的标准化培养、细胞分泌的外泌体等相关研究中,血清中所含的外泌体会对研究结果产生巨大的干扰作用。
  
  无外泌体血清*可以满足外泌体研究中对细胞培养条件的要求。以优质胎牛血清为源血清,经特定方法处理后,血清中外泌体去除率达到97%以上。通过细胞生长实验,含有外泌体freefbs的培养基支持大多数细胞的生长。与含有正常血清(FBS)的培养基相比,对细胞生长和存活有相同甚至更好的促进作用。
 
  

无外泌体血清
 

 

  制备无外泌体血清常用的方法是超速离心。主要有三种方法:将血清与培养基按1:4比例稀释,然后超速离心10000g过夜收集上清液;血清10000g直接离心过夜;以180000g离心3-6小时。隔夜离心时间视情况而定,一般在10-14小时之间。
  
  需要注意的是,离心后,外泌体会在试管底部富集。吸上层血清时不要接触底部沉淀物。上层血清约80%被吸收,剩余的混浊血清留作其他非外泌体细胞的培养。对于超速离心后的血清,可以检测粒径(离心前后的样品)。如果纯度不够,则将离心后收集的血清进行第二次超速离心。
  
  无外泌体血清使用注意事项:
  
  1、产品冷冻后,高丰度蛋白会形成晶体,NTA检测时会出现异峰,属正常现象。
  
  2、本产品已灭菌,可直接用于细胞培养。使用前请将产品置于2-8℃自然解冻,或分装后于-20℃保存,但不要反复冻融。
  
  3、请勿使用本产品进行高温热灭活。