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细胞培养常见问题
发布时间:2022-08-23 点击量:213

1、不同的细胞,对培养环境的要求不一样

这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。

尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。

所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度。

2、发现养的细胞形态怎么都不好

对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,或者细胞形态不清晰,表面似有异物等,可以在传代的时候进行如下操作:

首先,倒掉旧的培养基,加入 3 mL 新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走。然后再加入 3 mL 的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。

注:巨噬细胞我们只吹打,不消化的。

其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。10 分钟观察一次,20 分钟,30 分钟观察一次。选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入 3 mL 新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。这就是二传。

如果一次效果还不理想,可重复多次。直到找到细胞形态。其中要注意结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。这个方法真的很好用。

3、培养基的量

这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶 12 mL,大方瓶14mL 的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。对于生长速度快的细胞,易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。但是要注意换液掌握。

培养基又该如何选择呢?

经典/基础培养基属于合成培养基,是根据天然培养基的成分,用化学物质模拟合成、人工设计、配制的培养基,其主要成分有氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其他辅助成分,比如 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12,这些都是应用非常广泛的经典/基础细胞培养基。

人胚肾细胞 HEK-293(293) MEM+10%FBS+1%P/S 贴壁+悬浮生长

人胚肾细胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 贴壁+悬浮生长

人高转移鼻咽癌细胞系 5-8F  1640+10%FBS+1%P/S    贴壁生长

人鼻咽癌细胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 贴壁生长

人鼻咽癌细胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 贴壁生长

猪鼻甲黏膜成纤维细胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 贴壁生长

人卵巢癌细胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S   

人卵巢癌细胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌细胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌细胞 CoC1  1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明细胞癌细胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌细胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌细胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高转移卵巢癌细胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮细胞系 IOSE-80(IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN) 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢颗粒细胞瘤细胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌细胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰岛素

人卵巢癌细胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌细胞荧光素酶标记 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌细胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

仓鼠卵巢细胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中国仓鼠卵巢细胞k1 亚克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中国仓鼠卵巢细胞k1 亚克隆系 CHO-K1(悬浮) CHO GROW CD2培养基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中国仓鼠卵巢细胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

仓鼠卵巢细胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S

人高转移肺癌细胞 95-D  1640+10%FBS+1%P/S

 人肺癌细胞 A549  F12K+10%FBS+1%P/S   

 人肺癌细胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S

 人肺癌细胞荧光素酶标记 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S

人肺癌细胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S  

人肺癌细胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S

人非小细胞肺癌细胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸钠+1%P/S

人非小细胞肺癌细胞荧光素酶标记 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸钠+1%P/S

人非小细胞肺癌细胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%(10mM)HEPES +1%丙酮酸钠+1%P/S

人肺癌细胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸钠+1%hepes+1%PS

人经典小细胞肺癌细胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 细胞涨的慢2-3周发货

人肺癌细胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S

人肺癌细胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS

人肺癌细胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸钠+1%P/S

人肺癌细胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠

人肺癌细胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠

人肺癌细胞(淋巴结转移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S

人非小细胞肺癌细胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S

人小细胞肺癌细胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS

人大细胞肺癌细胞 NCI-H460 [H460]  1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠

人非小细胞肺癌细胞 NCI-H524  1640+10%FBS+1%P/S

人大细胞肺癌细胞 NCI-H661[h661]  1640+10%FBS+1%P/S

人小细胞肺癌细胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠+1%P/S

人肺癌细胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S

人小细胞肺癌 SBC-2  1640+10%FBS+1%P/S   

人小细胞肺癌细胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸钠+1% PS

小鼠肺癌细胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠肺癌细胞荧光素酶标记 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S

人脑髓母细胞瘤细胞 D283 Med  MEM+10%FBS+1%P/S

人脑髓母细胞瘤细胞 D341 Med MEM+1%丙酮酸钠+1%NEAA+10%FBS+1%P/S  

永生化人脑微血管内皮细胞 HCMEC/D3 内皮细胞培养体系(PriMed-iCell-002)

人脑胶质瘤细胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S  

人脑胶质细胞瘤细胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人脑胶质瘤 SNB-19 DMEM+10%FBS+1%P/S

人脑胶质瘤 TJ905 DMEM+10%FBS+1%P/S

人脑星形胶质母细胞瘤 U118MG(U-118MG) DMEM+10%FBS+1%P/S

人脑星形胶质母细胞瘤 U87MG MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

人脑星形胶质母细胞瘤+RFP U87MG+RFP MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

小鼠脑神经胶质母细胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠脑微血管内皮细胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S  

小鼠脑神经瘤细胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S

小鼠脑神经瘤细胞荧光素酶标记 neuro-2a+luc MEM+10%FBS+1%P/S

大鼠脑胶质瘤细胞 C6 F12K +2.5%FBS+15%HS(马血清)+1%P/S

大鼠脑胶质瘤细胞绿色荧光标记 C6+LUC F12K +2.5%FBS+15%HS(马血清)+1%P/S

大鼠脑星形胶质细胞 CTX DMEM+10%FBS+1%P/S  

大鼠脑I型星形胶质细胞 CTX-TNA2 DMEM+10%FBS+1%P/S

大鼠脑间质细胞 DI TNC1 DMEM+10%FBS+1%P/S 


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