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细胞培养中,使用培养板时常见问题解答~
发布时间:2022-08-19 点击量:375

细胞培养中,使用培养板时常见问题解答

1、96,24孔培养板或培养皿的盖子都很松,这样是方便了透气,但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?

答:(1)盖子很松,属于半开放培养,这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换,维持培养基的pH值)。

(2)有利必有弊,这样增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发,这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的:

a培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照,酒精擦洗,尽量少开关培养箱)

b培养箱内的湿度必须始终保持为100%(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。注意无菌操作!

2、我的细胞接种培养板,细胞总是聚集在周边部分,该如何处理啊?我看有的战友的细胞却是聚集在中间,是不是板子的质量问题?

答:请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者,而且是转圈摇匀的话,很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分,导致细胞中间少,四周多!自己可以试试!

一个好办法:在你培养种板之前,把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出,种入细胞时力量要轻,可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中,培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡,否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。

3、我的细胞传代很正常,但一种到六孔板里(不管加药和对照),总有两三个孔(随机)细胞长得不好,很小,像破碎了。有人遇到过这种情况吗?到底是啥原因呢?

答:可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液,培养基也是从4度冰箱拿出来不久,很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。

另外,跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。

或者放在37度水浴锅里孵育也可以,或者是培养板本身的问题,你再换换其它培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了,种板时的血清浓度调高试一下。

4、最近几天,我用六孔培养板接种细胞,培养24小时后更换培养基,在更换培养基之前,显微镜观察到细胞贴壁,状态非常的好,更换了培养基后,立即用显微镜观察,发现每个孔中都近乎有一半的细胞表现出近乎死亡的状态。细胞变得非常小,产生大量的碎片,而另一半的细胞一切正常,异常细胞与正常细胞之间存在一条分水岭,上半个圆是好的,下半个圆就不好,这是怎么一回事?

答:你可以看一下是不是以下这几个原因

a、培养板没放水平;

b、你的培养液如何,如果培养液过期,细胞就不会贴壁。换一点新配制的培养液试一试

c、可能是板的问题,换一个牌子的板或换用培养瓶就没问题了。

d、换培养基的时候有没有注意风机的影响,特别是所需换液的培养板很多时,容易使细胞因风吹失水而干缩破裂。如果如此,换液时应该逐个培养板进行,别怕浪费吸管,注意操作的效率!

5、把细胞消化接种到24孔板之后,已经四天了,老是每孔的中间部分长不满,每天换液时都用PBS 清洗,第二天换液时都出现同样的情况,每孔的边缘长的很好,中央大量死细胞?

答:如果细胞周围密而中间稀疏,大约有如下原因:

培养液加得太少。主要是由于液体张力的问题。

培养箱底部的水是否少了;

细胞接种后震荡太厉害了。由于离心力作用导致细胞分布到周围。

细胞分布均匀与否有一点很关键,即每种细胞是有个体差异的,别人的细胞操作不一定适合于你。所以要靠自己摸索,且找出专属于自己细胞的一套规律,有如下经验:

(1)所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。

(2)按资料记载,24孔板的液体量为1ml,其实1ml的量足矣。

(3)接种时,要慢慢加样,且记得轻微旋转枪头,加样不能太快,避免细胞在一个加样处聚集,且注意在不同的部位进行加样,即边加边活动枪头,人为使细胞趋于均匀分布。这样做对细胞均匀分布有一定效果。

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