细胞培养中，使用培养板时常见问题解答

1、96，24孔培养板或培养皿的盖子都很松，这样是方便了透气，但是细菌、霉菌等污染物会不会也随着溜进去呢?

答：（1）盖子很松，属于半开放培养，这样的目的是透气(实际上是为了使培养皿外的co2能够与培养皿充分交换，维持培养基的pH值)。

（2）有利必有弊，这样增加了污染的可能性。此外这样还会使培养皿内的液体蒸发，这对于精确定量的药物来说就显得值得注意了。所以以下二条措施是必须的：

a培养箱内空气必须清洁(定期紫外线照，酒精擦洗，尽量少开关培养箱)

b培养箱内的湿度必须始终保持为100%(培养箱内放置无菌蒸馏水的水槽)。注意无菌操作！

2、我的细胞接种培养板，细胞总是聚集在周边部分，该如何处理啊?我看有的战友的细胞却是聚集在中间，是不是板子的质量问题?

答：请问你的细胞是如何混匀的?是滴管吹打还是振荡培养板?如果是后者，而且是转圈摇匀的话，很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分，导致细胞中间少，四周多！自己可以试试！

一个好办法：在你培养种板之前，把培养板放入培养箱里进行几个小时的饱和后再取出，种入细胞时力量要轻，可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加入让细胞悬液流入板孔中，培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡，否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。

3、我的细胞传代很正常，但一种到六孔板里(不管加药和对照)，总有两三个孔(随机)细胞长得不好，很小，像破碎了。有人遇到过这种情况吗?到底是啥原因呢?

答：可能跟你加液的温度有关。如果你细胞刚刚拿出来换液加液，培养基也是从4度冰箱拿出来不久，很容易细胞就会冻死了。建议你最好把培养基先在培养箱里边孵育15min先。

另外，跟你细胞的生长状态也有关。加药之前的细胞可以用高点的血清浓度培养。保证细胞状态良好。

或者放在37度水浴锅里孵育也可以，或者是培养板本身的问题，你再换换其它培养板试试看。再有可能就是细胞状态问题了，种板时的血清浓度调高试一下。

4、最近几天，我用六孔培养板接种细胞，培养24小时后更换培养基，在更换培养基之前，显微镜观察到细胞贴壁，状态非常的好，更换了培养基后，立即用显微镜观察，发现每个孔中都近乎有一半的细胞表现出近乎死亡的状态。细胞变得非常小，产生大量的碎片，而另一半的细胞一切正常，异常细胞与正常细胞之间存在一条分水岭，上半个圆是好的，下半个圆就不好，这是怎么一回事?

答：你可以看一下是不是以下这几个原因

a、培养板没放水平；

b、你的培养液如何，如果培养液过期，细胞就不会贴壁。换一点新配制的培养液试一试

c、可能是板的问题，换一个牌子的板或换用培养瓶就没问题了。

d、换培养基的时候有没有注意风机的影响，特别是所需换液的培养板很多时，容易使细胞因风吹失水而干缩破裂。如果如此，换液时应该逐个培养板进行，别怕浪费吸管，注意操作的效率!

5、把细胞消化接种到24孔板之后，已经四天了，老是每孔的中间部分长不满，每天换液时都用PBS 清洗，第二天换液时都出现同样的情况，每孔的边缘长的很好，中央大量死细胞?

答：如果细胞周围密而中间稀疏，大约有如下原因：

培养液加得太少。主要是由于液体张力的问题。

培养箱底部的水是否少了；

细胞接种后震荡太厉害了。由于离心力作用导致细胞分布到周围。

细胞分布均匀与否有一点很关键，即每种细胞是有个体差异的，别人的细胞操作不一定适合于你。所以要靠自己摸索，且找出专属于自己细胞的一套规律，有如下经验：

（1）所有待接种的细胞悬液在种板前一定要用吸管混匀。

（2）按资料记载，24孔板的液体量为1ml，其实1ml的量足矣。

（3）接种时，要慢慢加样，且记得轻微旋转枪头，加样不能太快，避免细胞在一个加样处聚集，且注意在不同的部位进行加样，即边加边活动枪头，人为使细胞趋于均匀分布。这样做对细胞均匀分布有一定效果。

人源 肺微血管内皮细胞

人源 II型肺泡上皮细胞

人源 气管上皮细胞

人源 气管平滑肌细胞

人源 支气管上皮细胞

人源 支气管平滑肌细胞

人源 肺成纤维细胞

人源 肺动脉内皮细胞

人源 肺动脉平滑肌细胞

人源 心肌细胞

人源 主动脉内皮细胞

人源 心肌成纤维细胞

人源 心脏微血管内皮细胞

人源 主动脉瓣膜间质细胞

人源 冠状动脉内皮细胞

人源 冠状动脉平滑肌细胞

人源 颈动脉内皮细胞

人源 颈动脉平滑肌细胞

人源 食管上皮细胞

人源 食管平滑肌细胞

人源 食管成纤维细胞

人源 胃粘膜上皮细胞

人源 胃平滑肌细胞

人源 胃成纤维细胞

人源 小肠粘膜上皮细胞

人源 小肠平滑肌细胞

人源 小肠成纤维细胞

人源 结肠粘膜上皮细胞

人源 结肠平滑肌细胞

人源 结肠成纤维细胞

人源 胆囊上皮（永生化）细胞

人源 胆囊上皮细胞

人源 肝内胆管上皮细胞

人源 肝外胆管上皮细胞

人源 肝实质细胞

人源 肝星状细胞

人源 肝窦内皮细胞

人源 肝Kuffer细胞

人源 直肠成纤维细胞

人源 肝成纤维细胞

人源 直肠上皮细胞

人源 直肠平滑肌细胞

人源 胆囊微血管内皮细胞

人源 胆囊成纤维细胞

人源 胆囊平滑肌细胞

人源 胆囊动脉内皮细胞

人源 食管癌细胞

人源 食管纤维瘤细胞

人源 肾小管上皮细胞

人源 肾小球系膜细胞

人源 肾小球内皮细胞

人源 肾足细胞

人源 输尿管上皮细胞

人源 输尿管平滑肌细胞

人源 膀胱上皮细胞

人源 膀胱平滑肌细胞

人源 膀胱成纤维细胞

人源 前列腺上皮细胞

人源 前列腺成纤维细胞

人源 输卵管成纤维细胞

人源 甲状腺上皮细胞

人源 甲状腺成纤维细胞

人源 胰腺星状细胞

人源 胰岛细胞

人源 肾上腺皮质细胞

人源 肾上腺包膜成纤维细胞