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人静脉内皮细胞 (HUVEC)说明书
发布时间:2022-08-19 点击量:397

静脉内皮细胞

(HUVEC)

 

细胞介绍

该细胞来源人静脉内皮,可在半固体培养基中形成克隆,在免疫抑制小鼠不能形成肿瘤。

细胞特性

1) 来源:人脐带组织

2) 形态内皮细胞样 贴壁生长

3) 含量:>1x106  细胞数

4) 规格:T25或者1mL冻存管包装

5)  用途:仅供科研使用。

 

运输和保存:干冰运输及复苏好存活细胞11mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。(2T25瓶复苏的存活细胞常温发货,到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理:

1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在45X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的*培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的*培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶12传代 。                      

一.培养基培养冻存条件准备:

1)准备内皮细胞培养体系        

内皮细胞培养基础培养基                          93%

胎牛血清(FBS)                                5%

内皮细胞培养添加剂                              1%

青霉素/链霉素,P/S                              1%

2)培养条件 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度培养箱湿度为70%-80%

3)冻存液90%血清10%DMSO现用

细胞处理

1) 冻存细胞的复苏::

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL*培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,*培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml*培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%可进行传代培养

对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子PBS润洗细胞1-2

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA培养瓶中T251-2mLT752-3mL置于37培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml10%FBS的培养基来终止消化 

3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的*培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行

3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例;

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

 

注意事项:

1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意:冻存管浸没在液氮中会泄漏,并会慢慢充满液氮。解冻时,液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子,从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。

 


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