1. 血清沉淀是什么？   

血清中经常会出现肉眼可见的沉淀，其成分有多种类型，产生的原因有很多。主要有纤维蛋白（絮状沉淀）、甲胎蛋白、脂蛋白、冷凝集素、玻粘连蛋白、磷酸钙（显微镜下小黑点沉淀）、胆固醇等。

纤维蛋白（Fibrin）

血清中肉眼可见的沉淀物大多属于这一类型。由于在生产过程中，血清采集、过滤（3 次 0.1μm过滤）和灌装处理都是在低温条件下快速完成, 此时血清中纤维蛋白原（Fibrinogen）处于溶解状态。但在解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。

磷酸钙（Calcium Phosphate）

这是一种常见的沉淀成分，通常会造成血清出现云雾状浑浊。当血清在 37℃保存时，这种现象尤其明显，在倒置显微镜下可观察到小黑点的存在。这些小黑点在布朗运动的作用下四处游动，常被误认为是微生物污染。

其他成分（Other）

血清中的其他成分也会形成沉淀，例如胆固醇形成的油脂滴和其他蛋白沉淀等。

2. 沉淀是如何形成的？            

造成沉淀的主要原因是温度的改变、热灭活、反复冻融、长期储存于2-8℃或者室温。

3. 血清沉淀会影响细胞培养吗？

我们在出厂前都会对血清进行一系列质检测试，确保血清质量达到严格标准。血清测试和细胞培养经验也表明，其沉淀成分不会影响血清作为细胞培养添加物的表现。这一点得到了众多用户和其他血清供应商的肯定。解冻之后, 血清中纤维蛋白原往往会发生凝集，形成肉眼可见的沉淀。

磷酸钙颗粒经常会被当成微生物污染而引发不必要的担忧。一般情况下，当操作人员融化血清后注意到有雾状浑浊时，常将其存放在 4℃冰箱中观察，并考虑接下来是否继续使用。但这样会使沉淀进一步增多，反而会使血清更加浑浊，进而误以为存在血清污染。并且，在倒置显微镜下，可在血清中观察到小黑点（磷酸钙颗粒的布朗运动），更容易使人误以为存在微生物污染。

为防止这类误解的产生，我们不建议用户培养血清来验证是否存在污染，而是将血清直接接种在细菌培养基上进行培养，以观察是否有细菌的增殖。并且，进行革兰氏染色，并在油镜（100 X 10 倍）下观察可直接确认是否存在微生物污染。

WinSera血清采用先进的标准，经过3次0.1μm过滤，有效去除霉菌、细菌、酵母菌、支原体等，并通过ISO13485质量体系认证。

4. 如何避免血清沉淀                

正确解冻

首先，应按照逐步解冻的方式正确解冻血清：从-20℃取出后，置于4℃冰箱缓慢解冻，最后置于室温完成解冻。如果直接从-20℃拿到室温或37℃水浴解冻，则非常容易产生沉淀。在解冻过程中，请注意，应时不时缓慢摇晃血清瓶，可减少沉淀的产生。为避免反复冻融，建议您将血清分装使用。

使用和保存注意事项

血清沉淀很难预测和避免，出现沉淀后也无需担忧，这并不会影响血清的品质。已知血清沉淀在以下条件下会有增多的可能：

1) 热灭活；

2) 37℃培养；

3) 反复冻融；

4) 伽马射线照射；

5) 2-8℃长期保存；

6) 长期保存于可自动化霜的冰箱中（温度不稳定）；

血清沉淀的形成机理多种多样，具体的机理尚不十分明确。我们尚不能准确预测和控制血清沉淀的产生。目前市面上所有品牌的血清产品都存在沉淀现象，这一点可以在各品牌网站上关于沉淀问题的声明上得到证实。

5. 有沉淀时如何处理？             

我们建议您采用2000rpm离心5分钟，取上清使用就好，比过滤方便，不需要另外准备滤芯和针筒，且不容易污染。

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血清产品中出现沉淀属于正常现象，不会影响到血清的品质，对细胞培养也不会产生影响，大家可以放心使用，若不立即使用，血清应保存在-20℃以下。

在进行细胞培养时，我们经常会听到一些专业名词，原代培养是什么？什么是世代数？细胞系是什么？有限细胞系又代表的是什么？有的专有名词搞不清楚的话，会对细胞培养过程也会有一定的影响。根据老师们的反馈，我们总结了以下容易混淆的概念供大家参考~

1原代培养（Primary culture）

开始于直接取自生物体的细胞、组织或器官的培养称为原代培养。通常代表异质细胞群，很难标准化和繁殖。它们的寿命一般有限，而且已知它们会随着时间而改变其差异特征。

2传代（Passage(Subculture)）

细胞从一个皿里转移或传代到另一皿里的过程称为细胞传代。这是一个操作行为，无法准确定义细胞分裂次数。

3传代次数（Passage number）

一种细胞被传代培养的次数称为传代次数。

4世代数（Generation number）

一种细胞所经历的细胞数量倍增次数称为世代数。

5群体倍增时间（Population doubling time）

在对数生长期中期细胞数量翻倍所需要的时间间隔称为群体倍增时间。

6群体倍增次数（Population doubling）

在培养过程中细胞所经历的细胞数量倍增次数称为群体倍增次数。

7细胞系（Cell line）

原代细胞经过第一次传代后增殖的细胞称为细胞系或亚克隆。随着细胞的传代，生长能力*强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表现型上达到一定程度的均一性。

8细胞株（Cell strain）

细胞系通过选择或克隆获得的具有特征的细胞系称为细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株往往会获得其他一些遗传学改变。

9有限细胞系（Finite cell line）

通过传代增殖但在体外只能增殖有限细胞数量的一种细胞称为有限细胞系（通常60-70倍增次数）。

10衰老（Senescence）

与染色体端粒缩短相联系的生物调控的增殖潜力损失称为细胞衰老。存活的细胞也可能保留一些功能活性。

11永生化（Immortalization）

获得无限的寿命，可能是细胞自发产生的，也可能是以转染引起的。

12无限细胞系（Infinite/immortal/strain）

具有无限增殖能力的细胞系或细胞株称为无限细胞系/连续细胞系。

13平板效率（Plating efficiency）

在传代培养中产生集落的细胞的百分比称为平板效率。如果每个集落都可以说是来自一个细胞，那么平板效率等同于克隆效率/集落形成效率。有时，平板效率被粗略地用来描述传代培养后存活的细胞数量，但这被更好地称为种子效率。

导致细胞污染的原因主要有以下几方面：

环境：水浴锅、培养箱水盘、细胞培养箱内壁、超净台、桌面及试剂瓶身、细胞房空气消毒。

操作：细胞复苏、传代、冻存等过程中也可带入污染。

试剂：血清、基础培养基、胰酶、辅助试剂、营养添加物等。

耗材：培养皿或培养瓶、枪头。

细胞本身：本身携带污染、细胞老化、分化等。

如何进行污染源排查？

*血清：其他试剂保持不变，仅更换血清。

*基础培养基：其他试剂保持不变，仅更换基础培养基。

*PBS：其他试剂保持不变，仅更换PBS。

*胰酶：若细胞复苏的很好，一传代就污染，可以尝试其他试剂保持不变，更换消化用胰酶，看细胞状态。

细胞反复复苏都会出现污染，那可保持培养体系不变，培养其他类型且适用于此培养体系的细胞，观察是否有污染出现。整个营养体系：基础培养基、血清、营养添加物都可使用控制变量法进行排查。

*耗材

培养基及辅助试剂等条件不变，使用新耗材（培养皿或培养瓶、枪头）培养细胞，观察细胞是否有污染。

*细胞本身

细胞本身携带污染源。可对细胞进行无菌检测（细菌、真菌、支原体）。

细胞分化，细胞一旦分化，很难逆转，无法通过外界营养体系和生长条件的调整“*”。

*细胞老化：细胞一旦老化，是无法逆转的。

因此，大家需要学会观察细胞的形态并进行分析，可以按照这几点进行控制变量排查，如若确认是细胞本身问题，若细胞本身不是很昂贵，建议丢掉重新培养，若较珍贵，污染后可尝试根据污染种类选择合适的抗生素进行杀灭，分化和老化是没有办法补救的。