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关于WinSera血清热灭活问题
更新时间:2022-08-18 点击量:630
关于WinSera血清热灭活问题




1. 为何会有热灭活血清呢?

加热可以灭活补体系统。启动的补体系统参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞活化。在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。


2. 血清热灭活是否必要?

血清热灭活的步骤在1970年代就已建立,至今成为很多实验室的常规血清前处理步骤;但许多先前认为必须热灭活的原因,却早已经不再成立:

  • 去除支原体污染?

    早期血清加工使用的450nm滤膜,早已被100nm滤膜取代;且随着加工技术的创新及严格的监控,血清产品早已没有支原体污染的疑虑。


  • 去除补体等对热敏感的物质?

    胎牛血清中含有的补体仅为成年牛血清5-50%,而C3(补体中引起免疫反应的主成分)在胎牛血清中则几乎不能检出,直接使用血清对大多数的细胞株没有负面影响。


实验显示,大多数的细胞不需要热灭活血清,对于非必须的细胞来说血清灭活对于细胞生长只有微小甚至无任何作用,还可能造成生长速率降低,沉淀物还会显著增多,不利于细胞观察。因此,若非必须,不需要对血清进行灭活处理。


3. 血清热灭活对细胞生长有帮助吗?

细胞生物学家比较了正常热灭活胎牛血清对各种细胞株的生长能力影响,发现11株细胞中,热灭活对6 株细胞有负面影响(红)、3株无影响(绿)、2株有微弱正面改善(黄)。

▲ 使用未灭活或灭活血清的细胞生长状况

所以,在正常操作下,热灭活通常对“细胞生长"没有明显的促进作用,反而会破坏血清内生长因子,维生素,氨基酸等珍贵物质,降低细胞增殖速度。


4. 血清热灭活的缺点?

若实验员设错水浴温度或忘记按计时器,都会导致过高的加热温度(下图)或过长的加热时间(下图),进而大大降低血清的功能,影响细胞生长的表现。

缺点1:

▲ 过高的加热温度降低大多细胞株生长速度(仅一株未受明显影响)


缺点2:

▲ 过长的加热时间降低大多细胞株生长速度

(仅一株未受明显影响)


灭活加热过程会增加血清的沉淀状况,而沉淀又常常被认为是微生物的污染,进而耗费大量时间及精力验证是否污染,导致实验一再拖延。