01

问：看说明书里，如果样本浓度高，可以不用稀释，直接加原液。这个直接加血清原液，你们自己亲自做过吗？因为之前我们用别家的，他们说明书里，加样是：10微升样品加40微升样品稀释液。咨询他们如果如果浓度高，可以加原液吗？他们说可以，可能他们没做过，说可以。可我们做了，不可以。问他们，又说是可能离子浓度不够。

答：ELISA试剂盒检测范围是固定的，样本是否稀释是根据样本实际浓度来选择的，但前提条件样本要落在检测范围内，浓度高于检测范围，稀释样本达到检测范围内，浓度低于检测范围，那这个试剂盒灵敏度是不够的。离子浓度跟样本浓度没有关联不是影响ELISA试剂盒检测的关键。

02

问：双抗夹心法中，最后TMB用硫酸终止，测量OD450的时候是用单波长450nm还是双波长测量？如果是后者，参考波长是哪个？630nm可以吗？

答：如果有条件的话，就用双波长450nm，630nm。如果没有，单波长也可以。

03

问：牛免疫球蛋白G（IgG）试剂盒（ELISA）样本PH值对这个指标影响大吗？

答：有，要保持中性。不要太偏酸和太偏碱。规定最佳PH=7.2-7.4，可耐受PH5.0-9.0，此外PH值都不适用。

04

问：样本PH值偏小，用氢氧化钠调PH值合适吗？

答：合适，而且必须调！我们之前做的静脉注射免疫球蛋白PH=4，都是要调PH到中性。然后再测定。

05

问：

小鼠白细胞介素-12（IL-12 P35）ELISA Kit

小鼠白细胞介素-12（IL-12 P40）ELISA Kit

小鼠白细胞介素-12（IL-12 P70）ELISA Kit  

三个指标有什么区别和联系？

答：完整的IL-12由两条链通过二硫键相连，称为P70，而这两条链分别称为P35和P40。

IL-12是一由p35和p40（IL-12β）两条链组成的异源二聚体，两个亚单位通过二硫键连接在一起，这种结构在已发现的IL中所罕见。通常情况下，p40的量远超出p70，在鼠中已观察到p40同源二聚体的产生，是由转染的细胞分泌的，p40同源二聚体没有生物学活性，但它能和IL-12Rβ结合，与p70竞争性争夺IL-12受体（IL-12R）而拮抗其生物学作用。单独的p35不具有生物学活性，但却是合成p70的限速因子。

天然IL-12（p70 ）具有*的异源二聚体结构,是由p40 和 p35两个亚基通过二硫键共价连接而成的糖基化肽链〔相对分子质量为(70～75)×103〕.IL-12 p35和p40基因定位于不同的染色体,各自受不同的启动子和增强子调节,按需生成有活性的p70或拮抗性p(40)2及单体p40.活性形式的IL-12 p70需要两条亚基共同表达,并以1∶1形式进行自然组合.对已报道的IL-12基因载体来说,存在p40和p35不匹配的组合形式〔5-7〕.构建rhscIL-12融合基因,可使其在一个启动子的控制之下,翻译表达活性蛋白,保证p40和p35以1∶1比例形成单链异二聚体。

白介素-12是p70,p40是其中的一个亚基。

06

问：单核巨噬细胞的趋化因子有哪些？

答：CCL2、CCL3、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17和CCL22