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ELISA试剂盒常见问题
更新时间:2022-06-06 点击量:407


ELISA试剂盒常见问题





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01


:看说明书里,如果样本浓度高,可以不用稀释,直接加原液。这个直接加血清原液,你们自己亲自做过吗?因为之前我们用别家的,他们说明书里,加样是:10微升样品加40微升样品稀释液。咨询他们如果如果浓度高,可以加原液吗?他们说可以,可能他们没做过,说可以。可我们做了,不可以。问他们,又说是可能离子浓度不够。


:ELISA试剂盒检测范围是固定的,样本是否稀释是根据样本实际浓度来选择的,但前提条件样本要落在检测范围内,浓度高于检测范围,稀释样本达到检测范围内,浓度低于检测范围,那这个试剂盒灵敏度是不够的。离子浓度跟样本浓度没有关联不是影响ELISA试剂盒检测的关键。


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02

:双抗夹心法中,最后TMB用硫酸终止,测量OD450的时候是用单波长450nm还是双波长测量?如果是后者,参考波长是哪个?630nm可以吗?




:如果有条件的话,就用双波长450nm,630nm。如果没有,单波长也可以。


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03


:牛免疫球蛋白G(IgG)试剂盒(ELISA)样本PH值对这个指标影响大吗?




:有,要保持中性。不要太偏酸和太偏碱。规定最佳PH=7.2-7.4,可耐受PH5.0-9.0,此外PH值都不适用。


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04


:样本PH值偏小,用氢氧化钠调PH值合适吗?


:合适,而且必须调!我们之前做的静脉注射免疫球蛋白PH=4,都是要调PH到中性。然后再测定。


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05


小鼠白细胞介素-12(IL-12 P35)ELISA Kit

小鼠白细胞介素-12(IL-12 P40)ELISA Kit

小鼠白细胞介素-12(IL-12 P70)ELISA Kit  

三个指标有什么区别和联系?


:完整的IL-12由两条链通过二硫键相连,称为P70,而这两条链分别称为P35和P40。


IL-12是一由p35和p40(IL-12β)两条链组成的异源二聚体,两个亚单位通过二硫键连接在一起,这种结构在已发现的IL中所罕见。通常情况下,p40的量远超出p70,在鼠中已观察到p40同源二聚体的产生,是由转染的细胞分泌的,p40同源二聚体没有生物学活性,但它能和IL-12Rβ结合,与p70竞争性争夺IL-12受体(IL-12R)而拮抗其生物学作用。单独的p35不具有生物学活性,但却是合成p70的限速因子。


天然IL-12(p70 )具有*的异源二聚体结构,是由p40 和 p35两个亚基通过二硫键共价连接而成的糖基化肽链〔相对分子质量为(70~75)×103〕.IL-12 p35和p40基因定位于不同的染色体,各自受不同的启动子和增强子调节,按需生成有活性的p70或拮抗性p(40)2及单体p40.活性形式的IL-12 p70需要两条亚基共同表达,并以1∶1形式进行自然组合.对已报道的IL-12基因载体来说,存在p40和p35不匹配的组合形式〔5-7〕.构建rhscIL-12融合基因,可使其在一个启动子的控制之下,翻译表达活性蛋白,保证p40和p35以1∶1比例形成单链异二聚体。


白介素-12是p70,p40是其中的一个亚基。


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06

:单核巨噬细胞的趋化因子有哪些?


:CCL2、CCL3、CCL5、CCL7、CCL8、CCL13、CCL17和CCL22