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透析胎牛血清具体适用于实验中有哪些常见场景?
发布时间:2022-04-18 点击量:250

那么,透析胎牛血清具体适用于实验中有哪些常见场景?我们来详细讲讲。

一、实验过程中需要标记氨基酸

使用放射性标记小分子,对生物合成过程进行监测,以研究蛋白质等大分子的生化性质、合成、加工、细胞内传送、分泌和降解过程。这时,常将细胞放在含有充足养分和放射性标记氨基酸(如35S标记的蛋氨酸或半胱氨酸)的培养液中进行标记。

为避免外源未标记的氨基酸的干扰,这时所用的血清就是透析胎牛血清,不含蛋氨酸和半胱氨酸,基础培养基也要求不含蛋氨酸和半胱氨酸。

这种方法常见于生化代谢调控与疾病的机理研究。其他常见标记物包括14C标记的丝氨酸、亮氨酸、缬氨酸或32P标记的焦磷酸,这时培养液中的基础培养基和胎牛血清都要求不含有这种小分子。

二、稳定转染的细胞株的筛选

另一种需要用到透析胎牛血清的情况是稳定转染的细胞株的筛选。

最常见的基因工程用细胞株是二氢叶酸还原酶缺陷型(DHFR-)的CHO细胞。CHO(DHFR-)细胞由于不含DHFR,因而只能在含有胸苷、甘氨酸和次嘌呤的培养基中才能生长。若将DHFR基因导入这种缺陷型细胞,则细胞能在不含这三种分子的培养液中生长。同时,加入氨甲喋呤(MTX)可刺激DHFR基因大量表达,与之一同转染的外源基因就能大量表达,因而可以获得人们所需的基因工程药物。类似的情况也见于杂交瘤细胞的筛选。

这时的胎牛血清由于不含有次嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作为选择培养基的一部分,参与阳性转染细胞克隆的筛选。

基因调控的研究

采用报告基因检测系统(常见荧光素酶作为报告基因)进行基因调控的研究时,为避免特定外源小分子(如激素等)作为基因激动剂的干扰,即需要透析胎牛血清来培养基因转染后的细胞。

每个批次提供完整的检测报告。


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