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胎牛血清有必要热灭活吗
发布时间:2022-03-22 点击量:501

— 胎牛血清有必要热灭活吗 —

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目的

血清的灭活就是将血清置于56℃作用30min,然后将它们分装储存于-20℃。热灭活的目的是为了去除血清中的补体等对热敏感的物质,以排除对免疫分析的影响。胎牛血清中对补体的灭活则明显没有必要。研究人员曾对商业胎牛血清中的补体成分进行测定,他们发现胎牛血清中含有的C1、C6仅达成年动物血清的1-3%,而其它补体成分仅有成年动物的5-50%,至于补体的主要成分C3在胎牛血清中则几乎不能检出。通过补体固定实验,我们也在多个不同批次的胎牛血清中获得了相似的结果。此外,多数实验室在培养前将培养液进行预热的过程,也对热敏的补体有灭活的作用。因此,胎牛血清在大部分的细胞培养中是不需要灭活的,但在免疫学研究中,培养ES细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

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负面影响

虽然热灭活可以去除血清中的一些物质,减少免疫球蛋白的细胞毒性而不破坏多肽生长因子,但同时也会对一些血清中较不稳定的成分进行破坏,如生长因子和氨基酸。热灭活通常会降低血清支持细胞生长的能力,并且对血清的加热经常导致血清中沉淀的产生(这些沉淀主要是析出的纤维蛋白以及脂蛋白),而导致的沉淀又常常被认为是微生物的污染。注意到这个现象后,为了验证污染的存在或促进沉淀的溶解,许多培养者往往将血清放置37℃温育,这将会导致情况变得更糟,因为血清中的蛋白质会进一步的析出,再次破坏血清的营养成分。而为了确定血清未被污染所进行的镜检,无菌培养实验以及革兰氏染色实验更是浪费了实验者大量的时间以及精力,给用户以及供应商带来不必要的麻烦。

— 结论 —

综上所述,除了在免疫学研究中为排除补体的干扰需要对血清进行灭活外,多数细胞培养时血清的热灭活并不是必要的。我们建议,对于那些对血清进行灭活的用户,需要通过对比试验来证实其必要性,并确定灭活的适当条件;此外,在灭活过程中,需要严格认真监测,并选择一个可重复的方案进行操作。


 

 

 


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