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如何选择ELISA试剂盒
发布时间:2022-03-09 点击量:393

ELISA试剂盒又称为酶联免疫试剂盒,用于对液体样本中的目标物质进行定性和定量检测。随着国家对科研项目的重视,在科研单位和广大科研类院校也越来越受欢迎。


ELISA试剂盒之所以受欢迎和它自身的优点是分不开的。


首先适合检测的样本很广泛包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本,具体根据试剂盒说明书决定,通常检测灵敏度比较高。


其次ELISA是将酶催化的放大作用与特异性抗原抗体反应结合起来的一种微量分析技术。酶标记抗原或抗体以后,既不影响抗原抗体反应的特异性,也不改变酶本身的活性。


最后因为ELISA试剂盒操作不依赖昂贵的仪器,且具备准确性高、反应时间短等优点,所以适合大批量的检测,就连食品检测行业ELISA试剂盒也备受青睐。


目前市场上的ELISA试剂盒质量参差不齐,如何去挑选适合自己的试剂盒就显得特别重要,具体有以下几点可供参考。



01

试剂盒的应用种属、检测样本的种类



除试剂盒特别说明外,一般不同种属不能通用。常见待测样本种类有:血清和血浆(不同抗凝剂),细胞上清,和细胞裂解液,试剂盒中不同样本的稀释液不混用。



02

试剂盒的检测范围



也就是标准曲线范围,特别要注意待测样本浓度是否落在标准曲线范围内,对于浓度很高的样本,可以先进行预实验摸索到比较好的稀释倍数后再大量测定样本。



03

特异性



ELISA试剂盒的特异性与试剂盒的关键组分--抗体对有关。若抗体对中之一为多抗,另一个必须为单抗,如有条件最好是使用双单抗。



04

灵敏度



灵敏度反映的是试剂盒检出被检物质的低量的能力,用户可根据自己样本中待检指标的含量/浓度选择合适的试剂盒,如果待检指标含量很低,一般的试剂盒不能满足要求,建议选择高敏的ELISA试剂盒。



05

重复性



科学实验讲求重复性,ELISA试剂盒,其板内和板间变异系数应该控制在15%以内。



06

简便性



试剂盒在保证高质量数据的情况下,实验时间越短,操作越便利,越容易受到用户欢迎。



07

美誉度



一个品牌不光要有度,更重要的是美誉度。通过行业调查公司以及网络,相关宣传资料等可以找到美誉度高的ELISA试剂盒供应商,这个反映的不仅是产品质量的问题,对供应商的售前售后服务也是一个非常严格的检验。


常见的高美誉度品牌进口的有R&D、Raybiotech、Merck-Millipore、Sigma-Aldrich、Thermo等,国产的有义翘神州、博奥森、neobioscience等。



08

文献引用



产品的文献引用特别是高质量的SCI文章引用是很多用户都关心的问题,这是业界对产品认可的一个非常重要指标,而且对相关用户的科研有一定的借鉴作用。


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ELISA盒子使用技巧



样本的准备:尽量使用新鲜样本,不使用有溶血,被细菌污染、标本保存时间过长和标本凝固不全的样本。ELISA检测宜采集新鲜标本,如不能立即测定,5天之内应4℃保存,对于1周后检测的样本应低温冻存;做好分装,长时间冻存的样本避免反复冻融。


仔细阅读说明书:所有操作严格按照说明书。


不同批次的试剂不要混用,检查各组分的有效期。


预包被的酶标板条和各试剂组份需要室温平衡30 min以上,这样做的目的能使反应微孔内的温度较快地达到所需温度,预防后续实验中由于孵育温度或是时间不够充分,而将一些弱阳性样本不能检出。


待测样本加样:待检样本过多时,建议分批操作;需要稀释的样本提前做好稀释,注意选对合适稀释液;控制好加样时间,避免加样费时过长造成误差;注意加样角度,垂直加入孔底,不要接触孔壁, 做到一份样本一个移液头,防止交叉污染。


温育和洗板:温育时间和温度一般根据试剂盒的说明书进行选择。①手工洗板时,拍板时要垂直,避免交叉污染,用力不能过猛,防止抗原抗体复合物脱离;②洗板机洗板时应经常检查冲洗头是否通畅。


显色:市售ELISA试剂盒中,一般是以四甲基联苯胺(TMB)为底物的显色液,反应条件为37℃或室温反应15~30 min。显色反应需要避光。


读数和数据分析:终止后读取结果尽量在15min内完成,读取OD值时酶标仪需先预热15~30 min再进行。标曲的相关系数(R2)一般需要大于0.99。


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