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细胞培养中黑点的问题~~
发布时间:2022-03-08 点击量:448

24、培养中常出现一些黑点,是污染吗?

首先肉眼观察培养液是否变浑浊,如果变浑浊,基本可以确定是污染;如果肉眼观察培养液没有变浑浊:在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则,是否运动,是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则,做布朗运动,黑点可能是细胞碎片(可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的),也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的,也可能是细胞的代谢产物。如果黑点大小一致,快速移动,很可能是细菌污染。

 

25、如何预防细胞培养中黑点的产生?

掌握细胞传代的最佳时机,不要细胞长老了再传代;掌握好消化时间,防止消化过度产生细胞碎片;减少血清等试剂的冻融次数;将培养液的PH调到最佳;严格控制水质和器皿的清洁。

 

26、黑点已经产生了,如何进行处理?

如果判定黑点是污染,请及时将细胞处理后丢弃。其他情况,可参照以下进行:

如果是悬浮细胞:收集细胞上清慢速离心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更换新的培养瓶;如果是贴壁细胞:将细胞用PBS洗2-3遍,洗的时候,轻轻拍打培养瓶,让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落,再弃去PBS,消化时先加低浓度的胰酶如0.05%胰酶消化1 min左右,让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来,去掉低浓度胰酶,然后正常消化细胞,将收集的细胞悬液慢速离心(500-600 rpm/min,5-6 min)并更换新的培养瓶,并可以尝试适当增加血清浓度进行培养。

 

27、培养用dish,flask是否相同?

不同厂牌的dish或flask,其所coating的polymer不同,制造程序亦不同,虽对大部分细胞没有太大之影响,惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish或flask而有显著之生长差异。


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