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细胞培养那点事儿.....
发布时间:2021-11-12 点击量:75

    细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一,可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事,必先利其器。细胞好不好,就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。

❤  原代培养

从原代组织中分离细胞的常用的方法是酶解法(胰蛋白酶和胶原酶)。

用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片,用平衡液(无钙镁离子)清洗组织碎片后去除上清液,并加入0.25%的胰蛋白酶(Trypsin,100mg组织加入1ml胰蛋白酶)或者胶原酶(Collagenase,50~200单位/ml),孵育4-18h。离心取上清后,用平衡液清洗几次后,用完全培养基悬浮细胞,进行培养。

❤  传代培养

依据细胞生长的特点,传代方法有3种:

1. 悬浮生长细胞传代(离心法)

将悬浮细胞离心(1000 rpm, 3 min)去上清,收集沉淀物加新培养基,混匀后进行传代培养。

2. 半悬浮生长细胞传代(直接吹打法)

此类细胞(如Hela细胞)部分贴壁,但黏贴不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来,进行传代。

3. 贴壁生长细胞传代(酶消化法)

去除瓶内培养液后,加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液覆盖整个瓶底为准)37℃静置2-10min(显微镜下动态监测)。移去蛋白酶液,加入培养液反复吹打瓶壁细胞,离心将细胞沉淀用培养液制成细胞悬液。吸取1/10—1/40细胞悬液,接种于含有适量新鲜培养液的新培养瓶中进行传代培养。

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细胞培养是一个不断进步的过程,在平时做好积累,量变才会有质变。


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