细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一，可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事，必先利其器。细胞好不好，就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。

❤  原代培养

从原代组织中分离细胞的常用的方法是酶解法（胰蛋白酶和胶原酶）。

用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片，用平衡液（无钙镁离子）清洗组织碎片后去除上清液，并加入0.25%的胰蛋白酶（Trypsin，100mg组织加入1ml胰蛋白酶）或者胶原酶（Collagenase，50~200单位/ml），孵育4-18h。离心取上清后，用平衡液清洗几次后，用*培养基悬浮细胞，进行培养。

❤  传代培养

依据细胞生长的特点，传代方法有3种：

1. 悬浮生长细胞传代（离心法）

将悬浮细胞离心（1000 rpm， 3 min）去上清，收集沉淀物加新培养基，混匀后进行传代培养。

2. 半悬浮生长细胞传代（直接吹打法）

此类细胞（如Hela细胞）部分贴壁，但黏贴不牢，可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来，进行传代。

3. 贴壁生长细胞传代（酶消化法）

去除瓶内培养液后，加入1-2ml 0.25%的胰蛋白酶液（以消化液覆盖整个瓶底为准）37℃静置2-10min（显微镜下动态监测）。移去蛋白酶液，加入培养液反复吹打瓶壁细胞，离心将细胞沉淀用培养液制成细胞悬液。吸取1/10—1/40细胞悬液，接种于含有适量新鲜培养液的新培养瓶中进行传代培养。

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细胞培养是一个不断进步的过程，在平时做好积累，量变才会有质变。