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细胞培养问题----沉淀
发布时间:2021-11-11 点击量:85

细胞培养问题----沉淀

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当排除了污染后,细胞培养基的浑浊通常可以解释为金属、蛋白质和其他培养基成分的沉淀。沉淀物可能对细胞健康有害,因为他们可能通过整合作用等过程去除营养物质和其他需要的成分,从而改变培养基成分。

沉淀的原因

温度变化

温度是细胞培养中沉淀的主要原因之一。当暴露于端温度变化时,高分子量的血浆蛋白会从溶液中沉降。热失活和冻融循环会促进蛋白质的变性和沉淀。由于液体或复溶培养基在每次使用之间保持冷藏状态,盐可能会沉淀出来,特别是10倍或其他浓缩液中析出。

失水引起的浓度变化

如果培养基存在蒸发,培养基组分(包括盐)的浓度将增加。在培养基的表面特别容易形成晶体沉淀。

钙盐

在制备无血清培养基时,组分的添加顺序可能会导致不溶性分子的形成。钙盐特别容易沉淀。例如,CaCl2和MgSO4在溶液中反应形成CaSO4晶体。高压灭菌和pH值不稳定可能会加剧这一问题。

金属元素补充剂

铜、铁和锌金属元素是细胞生长所必需的,是无血清培养基的重要补充剂。其他血清成分的缺失可能会导致这些金属在培养基中沉淀,产生一个对细胞有毒的环境。铜和锌在氧化条件下更加容易沉淀。

污染

培养基浑浊可能是细菌或真菌污染造成的。

细胞培养中对沉淀的故障排除

温度

有关培养基的最佳储存和处理,应参阅制造商指南。避免重复的冻融循环。

钙盐

在逐个加入其他培养基组分之前,先将CaCl2单独溶解在去离子水中。

湿度

确保烧瓶和培养皿不存在蒸发。监测培养箱的湿度,密封培养器皿,防止干燥。

其他金属

加入铁结合蛋白转铁蛋白可防止铁在培养基中沉淀。

污染

丢弃被污染的细胞并对培养箱体进行消毒。遵循良好的实验室措施以避免污染。

有目的的沉淀

尽管通常在细胞培养中不希望有沉淀,但是沉淀可以用作上清液中蛋白质的纯化策略。例如,硫酸铵沉淀法有时被称为“盐析"技术,用于从杂交瘤上清液或血清中纯化抗体。


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