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细胞生长不良常见原因及解决方案
发布时间:2021-11-08 点击量:84

细胞生长不良常见原因及解决方案


储存物解冻后无活细胞或活细胞少

原因

解决方案

储存培养物质量不佳

确保正确识别了用于储存的起始培养物,该培养物是健康的,无微生物污染的,并且处于生长的对数阶段后期(80-90%汇合度

储存物冷冻不当

在液氮中冷冻细胞时2,请确保细胞、培养基和其他实际的浓度以及冷冻方案遵循供应商的建议。通常,应以每分钟约1至3℃的速度缓慢冻结,以大程度地减少冰晶的形成。

为细胞选择最合适的冷冻保护剂。如果使用甘油,请勿将其储存在光线下,因为光照会使甘油转化为具有细胞毒性的烯醛

储存物保存不当

存储物应始终保持在低于-130℃的温度下,理想状况是在液氮中。

储存物解冻不当

解冻细胞时,请遵循供应商推荐的方案。通常细胞应该迅速解冻,需使用预热的介质。

尽快除去含有冷冻保护剂的培养基,以防止细胞活性下降。

确保小心处理细胞,不要进行涡旋和高速离心,因为细胞在冻存后特别容易受到损伤。

解冻或传代后细胞附着不佳 

原因

解决方案

在塑料培养容器上的静电积聚(尤其是在低湿度的情况下)

增加室内温度。用(消毒过的)湿毛巾擦拭培养器皿外部。使用放静电装置

细胞、培养基和/或其他试剂混合不充分

确保细胞和所有试剂的溶液充分混合

滚瓶的转动太快

以缓慢的速度旋转瓶子

细胞生长缓慢

原因

解决方案

细胞传代次数过多

取用一个新的传代培养基次数较少的存储细胞

收获时细胞过度汇合

使用新的存储细胞开始培养,并在达到100%汇合度之前的对数期进行收获。

CO2水平与所用培养基的碳酸氢盐缓冲系统需求的不匹配,导致对PH控制不足。

确保培养瓶中的CO2水平符合缓冲系统中的需求。通常,缓冲液中碳酸氢盐浓度越高,培养箱中气体混合物所需的CO2浓度越高。

将培养物暴露于荧光下导致光敏感的培养基组分(核黄素、色氨酸和HEPES)转化为有细胞毒性的自由基和H2O2

将细胞和培养基放在暗处,避开荧光。

错误的细胞计数法

确保计数样品混合充分,以避免细胞密度局部差异影响细胞计数的准确性。再次检查使用细胞计数器手动方法的所有运算,或者考虑自动细胞计数方法。

细胞生长不均匀

原因

解决方案

容器内细胞、培养基混合不充分

通过轻轻涡旋确保细胞混合物和所有试剂适当混匀,移液管吹打以避免局部浓度差异。

同一时期相同的器皿之间的细胞生长不均匀可能是由于培养箱内的温度差异。

尽可能避免将培养器皿堆叠放置,因为底部的培养器皿最靠近金属架,可能升温最快。



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